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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by noheartman at 2010-07-28 10:18:51:
每隔几小时取菌体去做SDS-PAGE凝胶电泳是为了确定目的蛋白的最适合的表达时间，时间太短，母的蛋白表达量少，时间过长，对目的蛋白没好处，所以要确定一个合适的表达时间，蛋白产量不至于太低。SDS-PAGE凝胶电泳中 ...

你说的先去上清去跑胶，是看看上清中有没有分泌型蛋白是吗？
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31楼2010-08-11 14:50:08
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by seahow at 2010-07-28 17:58:41:
楼主几乎一点都不知道吗？
建议实验交给公司做做。
我解释如下，可以发贴再交流。不过 你应该注重基础知识；
每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取 ...

您说煮沸后的离心可以省去，如果我不省去的话，上清中是可溶性蛋白，沉淀中有可能是包涵体是吗？
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32楼2010-08-11 14:55:56
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seahow

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-08-11 14:55:56:

您说煮沸后的离心可以省去，如果我不省去的话，上清中是可溶性蛋白，沉淀中有可能是包涵体是吗？

应该是一些非水溶性蛋白。
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33楼2010-08-11 15:31:53
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jianghongli

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
874118楼: Originally posted by 黎亚丽 at 2010-07-28 17:41:48
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 20:50:15:
高温煮的蛋白变性是不可逆的过程

至于其他的点
你深入去想了之后，不就自己找到答案了 [/quot再问n
在问你个问题：外源基因在在大肠杆菌中表达是 ...

包涵体表达，所以需要破菌。。。才能得到目的蛋白。。。
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34楼2012-06-11 20:49:13
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