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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by noheartman at 2010-07-28 10:18:51:
每隔几小时取菌体去做SDS-PAGE凝胶电泳是为了确定目的蛋白的最适合的表达时间，时间太短，母的蛋白表达量少，时间过长，对目的蛋白没好处，所以要确定一个合适的表达时间，蛋白产量不至于太低。SDS-PAGE凝胶电泳中 ...

有人这样认为：菌体需要先用适量的水或者pbs缓冲液重悬，然后加入等体积的2xloading buffer，loadingbuffer中会包含有sds，甘油，指示剂和还原剂，煮沸的作用是使菌体裂解，蛋白与sds，还原剂等充分作用，这样子，蛋白的二级结构，二硫键等都就会被打破，蛋白与sds结合而带负电荷，且带负电荷的比率与蛋白大小的相关，这样蛋白在电泳过程中依照大小而分离达到预想中的分离效果。
这个是不是能说得过去？
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21楼2010-07-28 13:56:47
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 20:50:15:
高温煮的蛋白变性是不可逆的过程

至于其他的点
你深入去想了之后，不就自己找到答案了

本人比较愚笨，自己想不明白！
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22楼2010-07-28 13:57:20
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zhchch007

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
23楼2010-07-28 14:03:45
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zhchch007

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
24楼2010-07-28 14:06:35
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丹霞绝恋

银虫 (小有名气)
路过~~~
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25楼2010-07-28 14:16:25
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 20:50:15:
高温煮的蛋白变性是不可逆的过程

至于其他的点
你深入去想了之后，不就自己找到答案了 [/quot再问n
在问你个问题：外源基因在在大肠杆菌中表达是以可溶性蛋白表达还是包涵体的形式表达呢？
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26楼2010-07-28 17:41:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-07-28 17:41:48:
[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-27 20:50:15:
高温煮的蛋白变性是不可逆的过程

至于其他的点
你深入去想了之后，不就自己找到答案了 [/quot再问n
在问你个问题：外源基因在在 ...

你觉得呢？
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27楼2010-07-28 17:48:09
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seahow

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):建议很中肯，欢迎常来生物版~~ 2010-07-29 09:31:45
楼主几乎一点都不知道吗？
建议实验交给公司做做。
我解释如下，可以发贴再交流。不过 你应该注重基础知识；
每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？
1 离心 是取菌体，当然你的蛋白在菌体中；
2 沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），
这基本原理，用SDS使蛋白变性，呵呵。
3 煮沸 是加速并确认变性。
4 这部离心可以省略，是离心去掉不溶解的蛋白，呵呵，或者杂质。。 和悬浮后离心的意义不一样的。。。
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28楼2010-07-28 17:58:41
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黎亚丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by seahow at 2010-07-28 17:58:41:
楼主几乎一点都不知道吗？
建议实验交给公司做做。
我解释如下，可以发贴再交流。不过 你应该注重基础知识；
每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取 ...

谢谢，我现在通过学习知道了不少。是该注意基础知识的学习！
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29楼2010-07-28 20:58:26
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dingdingwww

蛋白质电泳实验 凝胶玻璃板 玻璃板 电泳梳 Bio-Rad 、gE

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk:警告：请不要在别人的主题帖里发广告！！ 2010-07-30 09:30:27
[ Last edited by silicare on 2010-8-30 at 11:50 ]
30楼2010-07-30 09:17:12
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