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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳 已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么?比如:每隔几小时取出的菌体,离心,沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮(意义?),煮沸(作用?)离心,取上清上样,为什么不取沉淀?为什么悬浮后不直接离心?
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seahow

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):建议很中肯,欢迎常来生物版~~ 2010-07-29 09:31:45
楼主几乎一点都不知道吗?
建议实验交给公司做做。
我解释如下,可以发贴再交流。不过 你应该注重基础知识;
每隔几小时取出的菌体,离心,沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮(意义?),煮沸(作用?)离心,取上清上样,为什么不取沉淀?为什么悬浮后不直接离心?
1 离心 是取菌体,当然你的蛋白在菌体中;
2 沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮(意义?),
这基本原理,用SDS使蛋白变性,呵呵。
3 煮沸 是加速并确认变性。
4 这部离心可以省略,是离心去掉不溶解的蛋白,呵呵,或者杂质。。 和悬浮后离心的意义不一样的。。。
28楼2010-07-28 17:58:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑,这么干会有什么影响
2楼2010-07-26 18:50:48
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)

虾米意思
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
3楼2010-07-26 19:09:40
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烟大考研

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量,连细胞内的也一起算上,如果不是这样的话,你们先悬浮,煮沸后离心,这一步就不太正确
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
4楼2010-07-26 19:15:38
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