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黎亚丽

新虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么？比如：每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？

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1楼 2010-07-26 18:33:06

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seahow

木虫 (著名写手)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):建议很中肯，欢迎常来生物版~~ 2010-07-29 09:31:45

楼主几乎一点都不知道吗？
建议实验交给公司做做。

我解释如下，可以发贴再交流。不过你应该注重基础知识；
每隔几小时取出的菌体，离心，沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），煮沸（作用？）离心，取上清上样，为什么不取沉淀？为什么悬浮后不直接离心？
1 离心是取菌体，当然你的蛋白在菌体中；
2 沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮（意义？），
这基本原理，用SDS使蛋白变性，呵呵。
3 煮沸是加速并确认变性。
4 这部离心可以省略，是离心去掉不溶解的蛋白，呵呵，或者杂质。。和悬浮后离心的意义不一样的。。。