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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE凝胶电泳 已有13人参与

SDS-PAGE凝胶电泳每一步骤的作用是什么?比如:每隔几小时取出的菌体,离心,沉淀用2倍的SDS-PAGE缓冲液悬浮(意义?),煮沸(作用?)离心,取上清上样,为什么不取沉淀?为什么悬浮后不直接离心?
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by noheartman at 2010-07-28 10:18:51:
每隔几小时取菌体去做SDS-PAGE凝胶电泳是为了确定目的蛋白的最适合的表达时间,时间太短,母的蛋白表达量少,时间过长,对目的蛋白没好处,所以要确定一个合适的表达时间,蛋白产量不至于太低。SDS-PAGE凝胶电泳中 ...

有人这样认为:菌体需要先用适量的水或者pbs缓冲液重悬,然后加入等体积的2xloading buffer,loadingbuffer中会包含有sds,甘油,指示剂和还原剂,煮沸的作用是使菌体裂解,蛋白与sds,还原剂等充分作用,这样子,蛋白的二级结构,二硫键等都就会被打破,蛋白与sds结合而带负电荷,且带负电荷的比率与蛋白大小的相关,这样蛋白在电泳过程中依照大小而分离达到预想中的分离效果。
这个是不是能说得过去?
21楼2010-07-28 13:56:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呃……我觉得你还是去多想想实验的原理吧……
或者站在细菌的角度考虑,这么干会有什么影响
2楼2010-07-26 18:50:48
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黄大牛

铜虫 (初入文坛)

虾米意思
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
3楼2010-07-26 19:09:40
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烟大考研

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
ATP说的对……你们是不是想测总的蛋白表达量,连细胞内的也一起算上,如果不是这样的话,你们先悬浮,煮沸后离心,这一步就不太正确
心信其可行,则移山填海之难,终有成功之日;心信其不可行,则反掌折枝之易,亦无收效之期
4楼2010-07-26 19:15:38
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