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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切问题
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yanglinhui

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切问题 已有4人参与

质粒DNA 做模板，条带很亮，做10微体系双酶切鉴定，但是电泳出现拖带 ，连载体也没有，以前从没出过这样的问题 。急，请大家帮忙喽
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1楼 2010-07-25 21:22:43
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guixiaohua

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):分析的不错~ 2010-07-26 09:46:44
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4楼2010-07-26 08:31:58
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-07-25 22:30:57
是不是降解了？还有质粒做模板什么意思？是以质粒为模板扩出序列，然后再双酶切PCR产物吗？

[ Last edited by sunyongle1 on 2010-7-25 at 22:03 ]
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2楼2010-07-25 22:02:22
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先，看Marker怎么样，判断一下电泳是否出问题
之后，看酶切时间、温度有没有问题，看起来好像DNA都降解掉了
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3楼2010-07-25 23:35:42
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周_yan

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我认为你那酶切的时间可能有些长都切断了，还有可能质粒的量加的少，与做的胶和电泳液也有关系。最主要的应该是酶切时间过长，可以缩短一下酶切时间，做几个梯度试一试。
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5楼2010-07-26 11:00:38
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