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木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带已有22人参与

请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？

1楼 2010-07-23 22:04:49

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金虫 (小有名气)

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scelab(金币+3):谢谢交流！:tiger06: 2010-07-27 23:38:00

构建好的表达载体在大肠杆菌中不一定会表达的，就算你优化表达时间，IPTG的浓度或其他的，我做的是膜蛋白，pET28a就不怎么表达，或者以包涵体的形式表达。你可以试着进行一些N末端的修饰，看看有没有一定的效果。不过总的来说，通过优化表达条件基本是行不通的，换个载体也许行。

28楼2010-07-27 21:58:57

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金虫 (小有名气)

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遇到过这样的情况，你以为连接到表达载体上就表达啊，不是这样的，要尝试不同的载体、不同的表达菌株及优化表达条件，后面的天地还宽着呢！

37楼2010-08-10 15:31:35

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