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gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教蛋白电泳样品制备的问题 已有7人参与

本人第一次跑蛋白电泳,所要测定的是酵母细胞胞内的一个蛋白(谷氨酰半胱氨酸合成酶),请问如何处理样品才能点样呢?另外,接种的时候是接到5ml YEPD过夜培养直接测定,还是有必要接到发酵培养基长到对数期末再测定呢?
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zhengjiess

木虫 (著名写手)


gundamba(金币+1):谢谢参与
唉,最近我也遇到差不多的问题。样品蛋白总是制备不好,也不知道到底是什么原因。至于楼主的问题,因为没有做过这方面的东西,所以还是不发表什么言论了,希望楼主早日解决这个问题。
选择了就不要后悔
2楼2010-07-05 14:51:22
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)

★ ★
gundamba(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 16:53:26
加还原性loading buffer  煮沸十分钟,,即可!
我无法改变自己的出生,但我可以决定自己的命运:命中注定我是一个王者,我必须拿出王者的风范!!!
3楼2010-07-05 15:43:17
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zemin_fang

木虫 (正式写手)


gundamba(金币+1):谢谢参与
Native-PAGE or SDS-PAGE?
4楼2010-07-05 17:48:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


gundamba(金币+1):谢谢参与
楼上问题is ok
5楼2010-07-05 18:29:23
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ydgua

捐助贵宾 (小有名气)


gundamba(金币+1):谢谢参与
对呀,是跑变性还是非变性?
6楼2010-07-05 19:51:15
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ydgua at 2010-07-05 19:51:15:
对呀,是跑变性还是非变性?

变性,是酵母,又是胞内酶,现在用宝生物的一个试剂,可以破壁,但是样品的生物量不知道怎么保持一致,我要对比着看...
7楼2010-07-06 00:10:26
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-05 17:48:43:
Native-PAGE or SDS-PAGE?

SDS-PAGE
8楼2010-07-06 00:11:02
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天外飞仙→顺 at 2010-07-05 15:43:17:
加还原性loading buffer  煮沸十分钟,,即可!

酵母胞内酶,直接用用BUFFER不能吧?破壁都困难呢
9楼2010-07-06 00:11:43
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ydgua

捐助贵宾 (小有名气)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-06 07:15:35
生物量的一致性可以用蛋白定量试剂盒或者自己配试剂定量
10楼2010-07-06 00:24:23
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