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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教蛋白电泳样品制备的问题
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gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教蛋白电泳样品制备的问题 已有7人参与

本人第一次跑蛋白电泳，所要测定的是酵母细胞胞内的一个蛋白（谷氨酰半胱氨酸合成酶），请问如何处理样品才能点样呢？另外，接种的时候是接到5ml YEPD过夜培养直接测定，还是有必要接到发酵培养基长到对数期末再测定呢？
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1楼 2010-06-28 16:23:46
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ydgua at 2010-07-05 19:51:15:
对呀，是跑变性还是非变性？

变性，是酵母，又是胞内酶，现在用宝生物的一个试剂，可以破壁，但是样品的生物量不知道怎么保持一致，我要对比着看...
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7楼2010-07-06 00:10:26
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-05 17:48:43:
Native-PAGE or SDS-PAGE?

SDS-PAGE
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8楼2010-07-06 00:11:02
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天外飞仙→顺 at 2010-07-05 15:43:17:
加还原性loading buffer  煮沸十分钟，，即可！

酵母胞内酶，直接用用BUFFER不能吧？破壁都困难呢
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9楼2010-07-06 00:11:43
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ydgua at 2010-07-06 00:24:23:
生物量的一致性可以用蛋白定量试剂盒或者自己配试剂定量

请问这个试剂盒是把蛋白的量定为一致还是生物量呢？谢谢！
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11楼2010-07-06 09:41:45
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