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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教蛋白电泳样品制备的问题
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gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教蛋白电泳样品制备的问题 已有7人参与

本人第一次跑蛋白电泳，所要测定的是酵母细胞胞内的一个蛋白（谷氨酰半胱氨酸合成酶），请问如何处理样品才能点样呢？另外，接种的时候是接到5ml YEPD过夜培养直接测定，还是有必要接到发酵培养基长到对数期末再测定呢？
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1楼 2010-06-28 16:23:46
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zhengjiess

木虫 (著名写手)
★
gundamba(金币+1):谢谢参与
唉，最近我也遇到差不多的问题。样品蛋白总是制备不好，也不知道到底是什么原因。至于楼主的问题，因为没有做过这方面的东西，所以还是不发表什么言论了，希望楼主早日解决这个问题。
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选择了就不要后悔
2楼2010-07-05 14:51:22
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)
★ ★
gundamba(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 16:53:26
加还原性loading buffer  煮沸十分钟，，即可！
赞一下(2人) 回复此楼
我无法改变自己的出生，但我可以决定自己的命运：命中注定我是一个王者，我必须拿出王者的风范！！！
3楼2010-07-05 15:43:17
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
gundamba(金币+1):谢谢参与
Native-PAGE or SDS-PAGE?
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4楼2010-07-05 17:48:43
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
gundamba(金币+1):谢谢参与
楼上问题is ok
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5楼2010-07-05 18:29:23
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ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
★
gundamba(金币+1):谢谢参与
对呀，是跑变性还是非变性？
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6楼2010-07-05 19:51:15
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ydgua at 2010-07-05 19:51:15:
对呀，是跑变性还是非变性？

变性，是酵母，又是胞内酶，现在用宝生物的一个试剂，可以破壁，但是样品的生物量不知道怎么保持一致，我要对比着看...
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7楼2010-07-06 00:10:26
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zemin_fang at 2010-07-05 17:48:43:
Native-PAGE or SDS-PAGE?

SDS-PAGE
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8楼2010-07-06 00:11:02
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天外飞仙→顺 at 2010-07-05 15:43:17:
加还原性loading buffer  煮沸十分钟，，即可！

酵母胞内酶，直接用用BUFFER不能吧？破壁都困难呢
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9楼2010-07-06 00:11:43
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ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-06 07:15:35
生物量的一致性可以用蛋白定量试剂盒或者自己配试剂定量
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10楼2010-07-06 00:24:23
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