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lly198784

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酶活测定求助已有6人参与

求助测:烟酸磷酸核糖转移酶(NAPRTase)的酶活测定方法。
它是催化烟酸=烟酸单核苷酸的反应的,过程中伴随有ATP+磷酸核糖焦磷酸=ADP+Pi+PPi。
一篇文献上是这样写的,但是我没有看明白。
Nicotinic acid phosphoribosyl transferase activity was measured following the formation of ADP. The reaction mixture contained 4.5 mM ATP, 1.5 mM phosphoribosyl pyrophosphate,45 mM potassium phosphate, pH 7.5, 45 mM Tris-
HCl, pH 7.5, 15 mM MgCl2, 0.15 mM nicotinate [34], 4 mM phosphoenolpyruvate, 0.2 mM NADH, 13U lactate dehydrogenase,and 13 U pyruvate kinase. The reaction was started by the addition of nicotinate. The concomitant consumption of
NADH (e340nm = 6.3 mM–1 cm–1) was monitored photometrically.
请大侠们指点指点,ADP的生成怎么测啊,没有说啊!
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含章冰婵

金虫 (小有名气)

★ ★
看天(金币+2):新手奖励 +热心回答 2010-06-28 11:17:29
lly198784(金币+2): 2010-07-09 11:04:22
有一个例子你可以参考下:

                     己糖激酶
葡萄糖+ATP————————葡糖-6-磷酸+ADP

                               葡糖-6-磷酸脱氢酶
葡糖-6-磷酸+NADP+————————————葡糖酸-6-磷酸+NADPH

还原性NADPH在340nm有吸收高峰,而氧化型则无,因此根据它来测己糖激酶的酶活。
6楼2010-06-27 23:17:11
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