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lvtd

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】引物设计已有5人参与

我设计了以对引物，TM值上游是63.5 下游是61.5 如果加上酶切位点和保护碱基就快到80了，那么退火温度怎么办啊？哪个大虾给点意见啊~~

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tobeornottobe,thisisaquestion!

1楼 2010-06-11 14:38:31

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biogefart

木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

理论是理论，直接用53度先试试

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闹太套

5楼2010-06-12 07:22:57

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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-11 15:25:08

你可以做个温度梯度，然后再选择合适的温度。

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2楼2010-06-11 14:55:20

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ben1147

木虫 (正式写手)

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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-12 04:08:34

新引物总是要做退火温度梯度来优化条件的，选择好的温度

如果直接P的话，可以前3-5个循环用稍低的温度（认为此时多余的碱基不与模板结合，不算在Tm之内）

后面的几十个循环用高温度

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3楼2010-06-11 15:49:12

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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

退火温度设定，不应包括酶切位点和保护碱基。以TM值上游是63.5 下游是61.5为准。

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4楼2010-06-12 01:48:56

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