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chener

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】载体酶切和连接 已有10人参与

请问各位高手,我的载体是用Xba I(粘性末端)和SmaI(平末端)进行双酶切的,请问我用T4 DNA连接酶和我的目的片段连接的时候,载体用不用去磷酸化,不去磷酸化载体会不会自连啊?

[ Last edited by lstt09nk on 2010-6-3 at 19:11 ]
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

chener(金币+5): 2010-06-03 23:41:38
去磷酸化没有必要!
5楼2010-06-03 21:50:31
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查看全部 13 个回答

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

chener(金币+5): 2010-06-03 23:41:20
控制好酶连的时间 应该问题不大
个人意见 仅供参考
尔非我焉知我悲喜
2楼2010-06-03 20:31:10
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1):欢迎交流。 2010-06-03 21:55:21
chener(金币+5): 2010-06-03 23:41:28
不会自连,连接时可参照平末端连接方法,温度用22度4小时-6小时,(如果T4酶用的是fermenantas)效果比16度过夜要好。这是我个人的心得,仅供参考。
3楼2010-06-03 20:47:18
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

chener(金币+5): 2010-06-03 23:41:33
应该不会自连的,连接效率应该会挺高的。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-06-03 21:39:44
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