24小时热门版块排行榜    

查看: 2008  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

donghuayang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取后酶切不动 已有10人参与

我提取的质粒按照正规操作完成,可就是酶切不完全,即使是48小时以后也不能完全酶切,请问谁知道会是什么原因呢?谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

读万卷书,不如行万里路;行万里路,不如阅人无数。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一米天堂

铜虫 (小有名气)

影响因素很多,自己先慢慢摸索,可以找λDNA切下,看看酶是否有问题。
一米天堂
7楼2010-05-24 20:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-24 22:54:25
酶切其实受的影响因素挺多的,加大酶的使用量或者改善一下缓冲液的体系。
2楼2010-05-22 23:12:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sushang

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-24 22:54:32
需要注意一些细节:比如,先加DNA, 后加缓冲溶液,再加酶;
温度是否是酶切的最适温度等;
再者 酶是否可以内切你的质粒?
3楼2010-05-23 00:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
donghuayang(金币+1):是的,我也出现过从一个菌株提取出来的质粒转化到另外的菌种里边去后提取出的质粒不正常 2010-05-23 13:06:47
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-24 22:54:40
可能的原因:
使用了非克隆菌株。DNA发生甲基化等修饰
使用了不常用的酶,如SacII,这种酶因未知的原因对某些本应是别的序列确实切不开。
酶的活性有问题。是不是加多了(甘油太多会影响活性),或是酶本身有问题。使用NEB的酶切一下试试。
生命的海洋里,我是蓝色的一滴
4楼2010-05-23 01:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见