应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取后酶切不动
51/1返回列表
查看: 1431  |  回复: 10
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

donghuayang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取后酶切不动已有10人参与

我提取的质粒按照正规操作完成，可就是酶切不完全，即使是48小时以后也不能完全酶切，请问谁知道会是什么原因呢？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
读万卷书，不如行万里路；行万里路，不如阅人无数。
1楼2010-05-22 23:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sushang

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:32
需要注意一些细节：比如，先加DNA， 后加缓冲溶液，再加酶；
温度是否是酶切的最适温度等；
再者 酶是否可以内切你的质粒？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-05-23 00:06:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:25
酶切其实受的影响因素挺多的，加大酶的使用量或者改善一下缓冲液的体系。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-22 23:12:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
donghuayang(金币+1):是的，我也出现过从一个菌株提取出来的质粒转化到另外的菌种里边去后提取出的质粒不正常 2010-05-23 13:06:47
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:40
可能的原因：
使用了非克隆菌株。DNA发生甲基化等修饰
使用了不常用的酶，如SacII，这种酶因未知的原因对某些本应是别的序列确实切不开。
酶的活性有问题。是不是加多了（甘油太多会影响活性），或是酶本身有问题。使用NEB的酶切一下试试。
赞一下(2人) 回复此楼
生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2010-05-23 01:32:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hiking8715

金虫 (小有名气)
donghuayang(金币+1):也有可能 2010-05-23 13:07:05
也有可能酒精没挥发干净
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-23 09:13:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭