应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取后酶切不动
111/2返回列表12下一页
查看: 1936  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

donghuayang

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取后酶切不动 已有10人参与

我提取的质粒按照正规操作完成，可就是酶切不完全，即使是48小时以后也不能完全酶切，请问谁知道会是什么原因呢？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
读万卷书，不如行万里路；行万里路，不如阅人无数。
1楼 2010-05-22 23:07:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:25
酶切其实受的影响因素挺多的，加大酶的使用量或者改善一下缓冲液的体系。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-22 23:12:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sushang

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:32
需要注意一些细节：比如，先加DNA， 后加缓冲溶液，再加酶；
温度是否是酶切的最适温度等；
再者 酶是否可以内切你的质粒？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-05-23 00:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
donghuayang(金币+1):是的，我也出现过从一个菌株提取出来的质粒转化到另外的菌种里边去后提取出的质粒不正常 2010-05-23 13:06:47
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-24 22:54:40
可能的原因：
使用了非克隆菌株。DNA发生甲基化等修饰
使用了不常用的酶，如SacII，这种酶因未知的原因对某些本应是别的序列确实切不开。
酶的活性有问题。是不是加多了（甘油太多会影响活性），或是酶本身有问题。使用NEB的酶切一下试试。
赞一下(2人) 回复此楼
生命的海洋里，我是蓝色的一滴
4楼2010-05-23 01:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hiking8715

金虫 (小有名气)
donghuayang(金币+1):也有可能 2010-05-23 13:07:05
也有可能酒精没挥发干净
赞一下 回复此楼
5楼2010-05-23 09:13:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fywjp

木虫 (正式写手)
这个不好说啊，看看你用的酶的说明书，条件有什么不一样吧
赞一下 回复此楼
6楼2010-05-23 09:46:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一米天堂

铜虫 (小有名气)
影响因素很多，自己先慢慢摸索，可以找λDNA切下，看看酶是否有问题。
赞一下 回复此楼
一米天堂
7楼2010-05-24 20:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Atalpha

木虫 (著名写手)
把质粒纯化一下，通常都是质粒不纯造成的
赞一下 回复此楼
8楼2010-05-24 20:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
质粒鉴定过吗？设计个引物看看
赞一下 回复此楼
9楼2010-05-24 21:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
donghuayang(金币+1):谢谢，不过我的那酶切48小时都无法改变，可能和你说的意思就是Solution 2有问题吧。 2010-05-25 10:02:13
还有一种可能是提取的时候造成质粒结构的部分改变，导致部分质粒无法被酶识别
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-25 08:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 donghuayang 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域 +13 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 14/700 2026-08-13 17:15 by KC9MWU4rq4LU
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭