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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶活测定中队反应的终止
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以诺9070

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶活测定中队反应的终止 已有2人参与

想根据底物的光吸收变化测定单位时间内的酶活（PMS+MTT或DCPIP），但面临一些窘境。
文献中好像都没有给出如何终止反应，我只想测定在第一分钟内反应的进行程度。这样操作还需要10秒钟左右，误差太大了！
酶反应需要在一定的温度下进行，只能用水浴，因为分光光度计无法保证温度，因此不能在分光光度计里连续测定
再者，反应体系的颜色依赖于ph，ph又与反应体系的温度相关。也就是说温度直接影响到整个的OD，不知如何是好！
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1楼 2010-05-20 20:22:49
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以诺9070

金虫 (小有名气)
根据以前摸的条件，我的酶，最适反应温度在70℃，就是加热煮沸估计也还能挺一段时间
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3楼2010-05-21 14:22:24
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李鹏举

铜虫 (初入文坛)
以诺9070(金币+1):thank you 2010-05-22 07:52:00
说下我的想法，只供参考，同求高手解答。我们做酶终止反应都是用高温加热，可以采用1.5毫升的EP管缩小反应，按比例缩小加底物溶液和酶液，这样1分钟反应完马上放沸水中，加热失活处理。再用酶标仪测吸光度。
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2楼2010-05-21 14:02:22
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zonka

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PMS和MTT也可以联用吗？
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4楼2017-08-20 12:59:48
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