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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr 问题求解！
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pcr 问题求解！ 已有12人参与

土壤中提取微生物群落总基因组以后扩增，
结果如下




看似都是弥散的但是好像还有差别啊 希望哪位大侠帮小弟解释一下 实在是 恼火的不行了啊 多谢 多谢！
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1楼 2010-05-17 20:31:25
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-17 20:57:34
9个泳道是同一个东西么？  第二个图的差别在于电泳跑歪了。  看marker比较明显。 原因可能是电泳液浑浊导致电压不均衡。
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2楼2010-05-17 20:56:18
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 21:45:31
没扩出来~

第一个是引物二聚体~
第二个你的胶倒厚一点，电压低一点

试试
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小木虫之有关部门负责人
3楼2010-05-17 20:58:27
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小白兄

金虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-05-17 21:45:14
你的marker跑的没有问题，之所以有点斜是由于电泳时的边缘效应。你全没P出来，那有很多原因。你扩增的片段是多大？过大的话也有可能扩不出来。还建议你下次做的时候加个阳性对照。
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时光如流水，匆匆而过。
4楼2010-05-17 21:38:33
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ideal9268

铜虫 (小有名气)
★
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第一个都是引物二聚体
第二个......你扩的这个基因应该是多大的？
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5楼2010-05-17 21:45:22
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cqyniu

金虫 (小有名气)
是不是引物设计的有问题啊，特异性不高
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6楼2010-05-17 21:55:36
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先你提完DNA后检测了没有？像上面的情况有两种，一是dna没有提出来，二是模板的量太大，所以建议先检测DNA的提取情况，若是很亮，就将模板稀释了以后再扩。
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多看文献，多学知识
7楼2010-05-17 22:55:46
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★
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感觉你的实验可能有两个问题：1、基因组DNA提取效果不好；2、引物设计是不是有问题？   先跑一下基因组DNA电泳，看提取效果，如果基因组提取结果没问题，那就是你的引物设计有问题了！！！
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大家共同交流、共同提高！！！
8楼2010-05-17 23:14:13
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nklyw

木虫 (正式写手)
★
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基因组提取效果不好啊，或许根本没有提出来吧。第一张图出现的带是引物二聚体啊，第二张也没有什么东西啊 。换个提取方法试一下吧
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9楼2010-05-17 23:31:54
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
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感觉问题如下
                  可能是1、DNA没有提取出来
                           2、点样没点好
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望大家都各有所获！
10楼2010-05-17 23:39:07
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