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汕头大学海洋科学接受调剂
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lovelyzxj

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开 已有8人参与

在上游引物中引入EcoR1酶切位点,在下游引物中引入Xho1酶切位点。pcr产物连接在PMD19-T simple vector上后,提取质粒做酶切后,EcoR1可以切开,Xho1不能切开。用同样的酶切体系切另外的质粒,可以切开,而且测序后酶切位点没有出现问题,现在正在找原因,求助。
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
甲基化不太可能,这个位点一般不受影响的~,倒是有可能质粒本身有问题~
9楼2010-05-18 13:14:17
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 17:06:46
甲基化影响,转化不含甲基化酶的菌株
2楼2010-05-17 17:05:23
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ottolzm

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呃  我马上要做基因工程菌了 我选的pET20b 酶切位点也是上游引物中加入EcoR1酶切位点,下游引物中引入Xho1酶切位点,你这结果犹如当头棒呀 呵呵 赶紧顶起来 同样求解  求助求助
3楼2010-05-17 20:45:32
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lovelyzxj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ottolzm at 2010-05-17 20:45:32:
呃  我马上要做基因工程菌了 我选的pET20b 酶切位点也是上游引物中加入EcoR1酶切位点,下游引物中引入Xho1酶切位点,你这结果犹如当头棒呀 呵呵 赶紧顶起来 同样求解  求助求助 :sw ...

我有另外的片段连的也是另外的T载体,选择的是同样的酶切位点,切开是没有问题的,不知道到这里就卡了是为什么。
4楼2010-05-17 21:34:26
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