应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开
141/2返回列表12下一页
查看: 3679  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lovelyzxj

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开 已有8人参与

在上游引物中引入EcoR1酶切位点，在下游引物中引入Xho1酶切位点。pcr产物连接在PMD19-T simple vector上后，提取质粒做酶切后，EcoR1可以切开，Xho1不能切开。用同样的酶切体系切另外的质粒，可以切开，而且测序后酶切位点没有出现问题，现在正在找原因，求助。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-17 14:29:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 17:06:46
甲基化影响，转化不含甲基化酶的菌株
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2010-05-17 17:05:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呃  我马上要做基因工程菌了 我选的pET20b 酶切位点也是上游引物中加入EcoR1酶切位点，下游引物中引入Xho1酶切位点，你这结果犹如当头棒呀 呵呵 赶紧顶起来 同样求解  求助求助
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-17 20:45:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovelyzxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ottolzm at 2010-05-17 20:45:32:
呃  我马上要做基因工程菌了 我选的pET20b 酶切位点也是上游引物中加入EcoR1酶切位点，下游引物中引入Xho1酶切位点，你这结果犹如当头棒呀 呵呵 赶紧顶起来 同样求解  求助求助 :sw ...

我有另外的片段连的也是另外的T载体，选择的是同样的酶切位点，切开是没有问题的，不知道到这里就卡了是为什么。
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-17 21:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovelyzxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-05-17 17:05:23:
甲基化影响，转化不含甲基化酶的菌株

谢了，准备试试
回复此楼
5楼2010-05-17 21:35:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也出现过同样的问题，我后来就不连T载体了，直接连接到最终载体，就切开了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-05-17 23:24:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白兄

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~~ 2010-05-18 13:33:40
一种是因为酶切位点甲基化了。还有就是你是单切还是双切？双切的话两个酶切位点靠的太近也会导致一个酶切不开的。
赞一下(2人) 回复此楼
时光如流水，匆匆而过。
7楼2010-05-17 23:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ottolzm at 2010-05-17 20:45:32:
呃  我马上要做基因工程菌了 我选的pET20b 酶切位点也是上游引物中加入EcoR1酶切位点，下游引物中引入Xho1酶切位点，你这结果犹如当头棒呀 呵呵 赶紧顶起来 同样求解  求助求助 :sw ...

哦 这样呀 看来还是和质粒有关的 赶紧做实验 看看结果 多多交流 多多交流
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-18 08:31:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
甲基化不太可能，这个位点一般不受影响的～，倒是有可能质粒本身有问题～
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-05-18 13:14:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lovelyzxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by plantst5928 at 2010-05-17 23:24:45:
我也出现过同样的问题，我后来就不连T载体了，直接连接到最终载体，就切开了

嗯，考虑到Xho1酶切位点的保护碱基随便加了两个碱基，而且胶回收后片段损失较多，还没尝试。
赞一下 回复此楼
10楼2010-05-18 15:09:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lovelyzxj 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 6/300 2026-09-02 23:59 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭