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小木虫小小

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】有没有做过植物切片的 已有5人参与

想学习点关于植物切片方面的知识,有哪位高人这方面的经验丰富,帮助一下。就是想看看茎秆中通气组织占的比例。

采集不同的处理条件下的植物样,移苗后,每月采集一次植株,立刻称重,然后切割茎秆。每次取样部位尽量一致,以减少变异性。截取的茎秆长度为5cm。样品取好后立即放入FAA固定液(50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml)并抽真空15分钟确保所有样品全部沉底,然后在固定液中固定24小时。经FAA固定的样品依次移入50%、60%、75%、85%、95%、100%的梯度乙醇溶液中进行脱水处理,脱水后用0.1%曙红(EosinY)染色。样品浸蜡前要在3/1、1/1、1/3的乙醇/Histoclear及3/1、1/1、1/3的Histoclear/石蜡中过度浸透,然后在60℃温度条件下浸蜡3天,每天换蜡两次。最后包埋、切片(厚度为8μm)。切片经过脱蜡,在光学显微镜下观察(Sanderson,1994)。

上面方法怎样?有什么要注意的么?
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-05-16 12:58:24
没太大问题,有几个细节需要注意:1. 截取茎秆的长度过长。最好控制在0.5厘米,以利于固定剂渗透,也可避免切片时发颤。再着说太长也无必要。 2. 100%乙醇以两次为妥。3. 因为通气组织的细胞壁较薄,固定剂最好用3-4%的戊二醛,材料的结构会保持的更好。如果仅仅是进行统计而不需要照片的话,徒手切片也未尝不可。仅作参考。
2楼2010-05-16 08:54:15
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小木虫小小

至尊木虫 (职业作家)

好的,非常感谢
到时候再有什么不懂的想你请教了 呵呵
3楼2010-05-16 20:22:20
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小木虫小小

至尊木虫 (职业作家)

要是做徒手切片的话,有没有具体的操作步骤的资料什么的推荐的啊?
我要计算通气组织的面积占茎秆总面积的比例,谢谢了啊
4楼2010-05-16 22:28:30
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大同静逸

银虫 (小有名气)

我有个师姐做过水稻通气组织研究

我也做过一点切片。认为,抽真空虽有利于浸透,但可能对通气组织造成破坏。请参考。
共同创造美好未来!
5楼2010-06-17 23:11:45
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xzl88

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyfgood: 金币+5, 鼓励新虫交流,可以论坛内发消息咨询! 2012-10-08 20:24:36
抽真空 有哪些方式 求解
6楼2012-10-08 20:13:14
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小木虫小小

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
1274044楼: Originally posted by xzl88 at 2012-10-08 20:13:14
抽真空 有哪些方式 求解

真空泵   你可以搜搜   不贵
7楼2012-10-08 21:35:38
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hanmy

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
浸蜡温度有点高了吧,我以前用的石蜡熔点是56~58的,一般就调57
8楼2012-10-10 13:06:58
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