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meredithwong铁虫 (初入文坛)
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[求助]
关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！
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各位大神好，我做的是毛梾合子胚的石蜡切片，用来研究胚的发育。但是每次做出来细胞都是破碎的，看起来细胞是空的，只剩下一个细胞的框架了；而且我用番红-固绿染色后片子染不上红色，只有一片绿色。。。如图（图是手机照的，不清晰请见谅） 我制作石蜡切片过程如下，取毛梾合子胚，FAA（50%酒精）固定液固定24h，逐级脱水：15%，30%，50%，70%，83%，95%，100%，100%，每级20min，纯酒精每级10min；透明：1/2二甲苯+1/2酒精15min，二甲苯5min，二甲苯5min；浸蜡：加3次碎蜡38℃温箱45min，换纯蜡45℃ 30min，再换纯蜡58℃ 30min，然后包埋；切片厚度是8μm；然后番红-固绿染色。我以前也尝试过脱水1h，透明30min，浸蜡3d左右，可是不管用哪种程序做细胞都是破碎的，急死我了！！！请各位大神提点，到底是哪一步程序出了问题。谢谢啦！！ 需要说明的是这个合子胚很小（一半芝麻那么大），含水量很高，一碰就会破碎，不知这个会不会对切片的过程造成影响？要怎么调整？谢谢各位大神！！   IMG_20130326_114845.jpg |
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