24小时热门版块排行榜    

查看: 2156  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

meredithwong

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题,急求帮助!

各位大神好,我做的是毛梾合子胚的石蜡切片,用来研究胚的发育。但是每次做出来细胞都是破碎的,看起来细胞是空的,只剩下一个细胞的框架了;而且我用番红-固绿染色后片子染不上红色,只有一片绿色。。。如图(图是手机照的,不清晰请见谅)
       我制作石蜡切片过程如下,取毛梾合子胚,FAA(50%酒精)固定液固定24h,逐级脱水:15%,30%,50%,70%,83%,95%,100%,100%,每级20min,纯酒精每级10min;透明:1/2二甲苯+1/2酒精15min,二甲苯5min,二甲苯5min;浸蜡:加3次碎蜡38℃温箱45min,换纯蜡45℃ 30min,再换纯蜡58℃ 30min,然后包埋;切片厚度是8μm;然后番红-固绿染色。我以前也尝试过脱水1h,透明30min,浸蜡3d左右,可是不管用哪种程序做细胞都是破碎的,急死我了!!!请各位大神提点,到底是哪一步程序出了问题。谢谢啦!!
        需要说明的是这个合子胚很小(一半芝麻那么大),含水量很高,一碰就会破碎,不知这个会不会对切片的过程造成影响?要怎么调整?谢谢各位大神!!
关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题,急求帮助!
IMG_20130326_114845.jpg
回复此楼
重口味屌丝爱科学
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meredithwong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wudiliusha at 2013-06-23 11:54:43
我不明白你明明是用50%的酒精固定后,还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么?我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的,你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在 ...

好的,谢谢你。固定液酒精浓度可以低到30%吗?
重口味屌丝爱科学
5楼2013-06-28 22:36:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

wudiliusha

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我不明白你明明是用50%的酒精固定后,还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么?我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的,你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在脱水的过程中有问题,后面切一般不会造成这种结果。
认真生活,快乐工作。
2楼2013-06-23 11:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你脱水时间是不是太短了。首先应该拿70%的酒精脱吧。至少也得一个小时吧。浸蜡的时间也太短了,最好升高点温度加长点时间。
3楼2013-06-24 11:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lion1998

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
lz用的FAA固定液是甲醛+乙酸+水吧?如果是的话应该没有什么问题。对于含水量高的材料,除了脱水过程要延长一些(我们一般能增加到30min/次),前面固定的时候,要真空抽气的。另外,不知道是楼主没有写清还是怎样,从二甲苯到石蜡这一步,也是需要比例梯度的,3:1,1:1,1:3,直到纯石蜡,每步我都是浸≥4小时的。
lz不要灰心,胚的大小没有影响,我做的材料种子只有三分之一芝麻大小,胚一样可以切出来的,实在不行你就换环氧树脂切,毕竟锇酸戊二醛固定,丙酮脱水效果更好
Iamaleafonthewind.
4楼2013-06-24 16:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 4/200 2026-09-02 21:47 by rM1TE0WVDIIY
[文学芳草园] 梦想 +6 myrtle 2026-08-26 9/450 2026-09-02 20:03 by 大飞鱼鱼鱼
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见