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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！
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meredithwong

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！

各位大神好，我做的是毛梾合子胚的石蜡切片，用来研究胚的发育。但是每次做出来细胞都是破碎的，看起来细胞是空的，只剩下一个细胞的框架了；而且我用番红-固绿染色后片子染不上红色，只有一片绿色。。。如图（图是手机照的，不清晰请见谅）
       我制作石蜡切片过程如下，取毛梾合子胚，FAA（50%酒精）固定液固定24h，逐级脱水：15%，30%，50%，70%，83%，95%，100%，100%，每级20min，纯酒精每级10min；透明：1/2二甲苯+1/2酒精15min，二甲苯5min，二甲苯5min；浸蜡：加3次碎蜡38℃温箱45min，换纯蜡45℃ 30min，再换纯蜡58℃ 30min，然后包埋；切片厚度是8μm；然后番红-固绿染色。我以前也尝试过脱水1h，透明30min，浸蜡3d左右，可是不管用哪种程序做细胞都是破碎的，急死我了！！！请各位大神提点，到底是哪一步程序出了问题。谢谢啦！！
        需要说明的是这个合子胚很小（一半芝麻那么大），含水量很高，一碰就会破碎，不知这个会不会对切片的过程造成影响？要怎么调整？谢谢各位大神！！
关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！
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重口味屌丝爱科学
1楼 2013-06-22 21:20:28
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你脱水时间是不是太短了。首先应该拿70%的酒精脱吧。至少也得一个小时吧。浸蜡的时间也太短了，最好升高点温度加长点时间。
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3楼2013-06-24 11:39:24
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wudiliusha

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我不明白你明明是用50%的酒精固定后，还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么？我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的，你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在脱水的过程中有问题，后面切一般不会造成这种结果。
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认真生活，快乐工作。
2楼2013-06-23 11:54:43
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lion1998

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lz用的FAA固定液是甲醛+乙酸+水吧？如果是的话应该没有什么问题。对于含水量高的材料，除了脱水过程要延长一些（我们一般能增加到30min/次），前面固定的时候，要真空抽气的。另外，不知道是楼主没有写清还是怎样，从二甲苯到石蜡这一步，也是需要比例梯度的，3:1,1:1,1:3，直到纯石蜡，每步我都是浸≥4小时的。
lz不要灰心，胚的大小没有影响，我做的材料种子只有三分之一芝麻大小，胚一样可以切出来的，实在不行你就换环氧树脂切，毕竟锇酸戊二醛固定，丙酮脱水效果更好
赞一下(1人) 回复此楼
Iamaleafonthewind.
4楼2013-06-24 16:07:18
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meredithwong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wudiliusha at 2013-06-23 11:54:43
我不明白你明明是用50%的酒精固定后，还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么？我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的，你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在 ...

好的，谢谢你。固定液酒精浓度可以低到30%吗？
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重口味屌丝爱科学
5楼2013-06-28 22:36:29
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