应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！
71/1返回列表
查看: 2120  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

meredithwong

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！

各位大神好，我做的是毛梾合子胚的石蜡切片，用来研究胚的发育。但是每次做出来细胞都是破碎的，看起来细胞是空的，只剩下一个细胞的框架了；而且我用番红-固绿染色后片子染不上红色，只有一片绿色。。。如图（图是手机照的，不清晰请见谅）
       我制作石蜡切片过程如下，取毛梾合子胚，FAA（50%酒精）固定液固定24h，逐级脱水：15%，30%，50%，70%，83%，95%，100%，100%，每级20min，纯酒精每级10min；透明：1/2二甲苯+1/2酒精15min，二甲苯5min，二甲苯5min；浸蜡：加3次碎蜡38℃温箱45min，换纯蜡45℃ 30min，再换纯蜡58℃ 30min，然后包埋；切片厚度是8μm；然后番红-固绿染色。我以前也尝试过脱水1h，透明30min，浸蜡3d左右，可是不管用哪种程序做细胞都是破碎的，急死我了！！！请各位大神提点，到底是哪一步程序出了问题。谢谢啦！！
        需要说明的是这个合子胚很小（一半芝麻那么大），含水量很高，一碰就会破碎，不知这个会不会对切片的过程造成影响？要怎么调整？谢谢各位大神！！
关于植物合子胚的石蜡切片细胞破碎的问题，急求帮助！
IMG_20130326_114845.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实用技术

» 猜你喜欢
重口味屌丝爱科学
1楼 2013-06-22 21:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wudiliusha

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我不明白你明明是用50%的酒精固定后，还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么？我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的，你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在脱水的过程中有问题，后面切一般不会造成这种结果。
赞一下(1人) 回复此楼
认真生活，快乐工作。
2楼2013-06-23 11:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你脱水时间是不是太短了。首先应该拿70%的酒精脱吧。至少也得一个小时吧。浸蜡的时间也太短了，最好升高点温度加长点时间。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-24 11:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lion1998

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lz用的FAA固定液是甲醛+乙酸+水吧？如果是的话应该没有什么问题。对于含水量高的材料，除了脱水过程要延长一些（我们一般能增加到30min/次），前面固定的时候，要真空抽气的。另外，不知道是楼主没有写清还是怎样，从二甲苯到石蜡这一步，也是需要比例梯度的，3:1,1:1,1:3，直到纯石蜡，每步我都是浸≥4小时的。
lz不要灰心，胚的大小没有影响，我做的材料种子只有三分之一芝麻大小，胚一样可以切出来的，实在不行你就换环氧树脂切，毕竟锇酸戊二醛固定，丙酮脱水效果更好
赞一下(1人) 回复此楼
Iamaleafonthewind.
4楼2013-06-24 16:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meredithwong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wudiliusha at 2013-06-23 11:54:43
我不明白你明明是用50%的酒精固定后，还要用<50%的酒精进行脱水。你这明摆着要细胞涨裂么？我一般都是使用大于固定也浓度进行脱水。

一般对于组织比较嫩的，你固定液浓度可以小一点。

看你这操作也应该是在 ...

好的，谢谢你。固定液酒精浓度可以低到30%吗？
赞一下 回复此楼
重口味屌丝爱科学
5楼2013-06-28 22:36:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meredithwong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lion1998 at 2013-06-24 16:07:18
lz用的FAA固定液是甲醛+乙酸+水吧？如果是的话应该没有什么问题。对于含水量高的材料，除了脱水过程要延长一些（我们一般能增加到30min/次），前面固定的时候，要真空抽气的。另外，不知道是楼主没有写清还是怎样， ...

非常感谢。话说我从二甲苯到石蜡是就是1:1，纯石蜡（软蜡），纯石蜡（硬蜡），每步都是45min左右，这样是不是太短了？还有你用的固定液也是FAA么？我看书上说做胚用纳瓦兴氏固定液比较好，我正在考虑试试这种。另外你用的染色剂是什么？
赞一下 回复此楼
重口味屌丝爱科学
6楼2013-06-28 22:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunpeiguang

银虫 (小有名气)
你做的方法有问题，可以考虑让我帮你做，收费比较高，其中有诀窍的，不能蛮干！
赞一下 回复此楼
做自己想做的事情，哦也
7楼2015-06-08 12:03:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 meredithwong 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 6/300 2026-08-25 08:44 by 白大多亮
[基金申请] 我面上完蛋了 +12 且听虎啸 2026-08-20 13/650 2026-08-25 08:42 by 绘中天
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭