| 查看: 2423 | 回复: 14 | |||
julia0708木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题 已有12人参与
|
|
本人是化学的，实验室最近申请到了一个生物方面的课题，所以有很多的问题都弄不懂，需要向大家请教一下。先谢过大家了。 按照课题的设想，我们需要先得到一种蛋白，然后在体外做它和一些配体的相互作用。所以现在问题的难点是在蛋白的获得的身上。 目前我们想到的方法是通过构建质粒然后进行表达来获得。 但是在构建的时候又有了一些问题。 大概整理了一下，如下： 首先，我们的蛋白是在人和哺乳动物中存在的蛋白，如果要获得这种蛋白，是不是用最常用的大肠杆菌表达系统无法获得有活性的蛋白？ 其次，我们的目的是为了考察蛋白和配体的结合情况，如果这样的话，是不是只要能够保证其蛋白LBD区域的活性就可以了呢？看到有文献报道在大肠杆菌系统中表达了该蛋白的LBD的部分，这个是不是就可以达到我们的目的呢？这样的蛋白是不是具有活性的蛋白？ 另外，还有个问题想问一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成仪来合成蛋白？这样的蛋白能否保证活性呢？和之前通过质粒构建表达的方法相比，两者所需要的成本哪个更高一些？ 很多问题不是很懂，说出来也很混乱，希望大家能帮忙解答下，谢谢大家！ |
回复此楼» 猜你喜欢
化学求调剂
已经有5人回复
-
一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学
已经有3人回复
-
332求调剂
已经有4人回复
-
265求调剂
已经有9人回复
-
328求调剂，英语六级551，有科研经历
已经有8人回复
-
求调剂
已经有3人回复
-
278求调剂
已经有6人回复
-
307求调剂
已经有10人回复
-
279分求调剂 一志愿211
已经有12人回复
-
297求调剂
已经有9人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 细胞稳定转染，质粒的设计
已经有15人回复
- 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题
已经有14人回复
- 关于质粒的构建
已经有17人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 求助：用pXMJ19构建的重组质粒在谷氨酸棒杆菌不表达，应该如何解决？
已经有6人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】酵母PRS整合表达质粒使用的问题，我需要你的帮助，谢谢
已经有7人回复
- 【求助/交流】构建表达质粒
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于PEt-28a质粒载体表达蛋白质的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
已经有6人回复
silicare
荣誉版主 (文坛精英)
合伙创业版兼职版主
- BioEPI: 14
- 应助: 88 (初中生)
- 贵宾: 29.823
- 金币: 18946.3
- 散金: 24272
- 红花: 300
- 沙发: 88
- 帖子: 10222
- 在线: 1602.6小时
- 虫号: 948825
- 注册: 2010-01-26
- 专业: 摩尼教
- 管辖: 新药研发
2楼2010-05-12 17:38:43
wordsworth3180
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3624.4
- 帖子: 703
- 在线: 337.8小时
- 虫号: 568607
- 注册: 2008-06-03
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2010-05-12 20:01:03
★ ★ ★ ★ ★ ★
julia0708(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:21:39
julia0708(金币+5):豁然开朗，非常感谢！ 2010-05-13 11:16:30
julia0708(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:21:39
julia0708(金币+5):豁然开朗，非常感谢！ 2010-05-13 11:16:30
|
简单试着回答 首先，我们的蛋白是在人和哺乳动物中存在的蛋白，如果要获得这种蛋白，是不是用最常用的大肠杆菌表达系统无法获得有活性的蛋白？ 这个不一定，有时候是可以的，有时候得用别的表达系统，如真核表达系统。 其次，我们的目的是为了考察蛋白和配体的结合情况，如果这样的话，是不是只要能够保证其蛋白LBD区域的活性就可以了呢？看到有文献报道在大肠杆菌系统中表达了该蛋白的LBD的部分，这个是不是就可以达到我们的目的呢？这样的蛋白是不是具有活性的蛋白？ LBD不知道什么意思，我理解是结合区域和活性区域，只表达结合区域肯定是没有活性的，但是有结合活性。 另外，还有个问题想问一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成仪来合成蛋白？这样的蛋白能否保证活性呢？和之前通过质粒构建表达的方法相比，两者所需要的成本哪个更高一些？ 当然全序列合成价格高，不过现在也在1万左右吧，质粒克隆 表达的话熟手只需要几百块。 |
4楼2010-05-12 21:03:35
julia0708
木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 4923.2
- 散金: 55
- 红花: 2
- 帖子: 355
- 在线: 124小时
- 虫号: 291294
- 注册: 2006-10-29
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
5楼2010-05-13 11:18:49
6楼2010-05-13 11:56:07
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
7楼2010-05-13 13:05:14
liyong1981 
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.1
- 散金: 116
- 帖子: 905
- 在线: 35.2小时
- 虫号: 357405
- 注册: 2007-04-27
- 性别: GG
- 专业: antibody
8楼2010-05-13 14:11:12
9楼2010-05-13 14:17:01
lingn
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1785.8
- 散金: 1
- 帖子: 745
- 在线: 44.7小时
- 虫号: 1008653
- 注册: 2010-04-29
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2010-05-13 21:25:48
40