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zhy19850501

[交流] 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因已有14人参与

大家好,我构建表达载体连接PET-28A,已经连接多次但都失败,感受态细胞也换了几次,鉴定全是假阳性,这可能是什么原因呢,希望大家多多帮忙!
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plantaqp

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhy19850501 at 2010-05-08 15:09:49:
我的目的片段浓度可能比较低,但不至于一点都连不上吧,我提的质粒确实是空载。

目的片段浓度越低效率越低,所以把目的片段浓度提高了在连接吧,否则费时费力有费神!
13楼2010-05-09 03:50:14
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plantaqp

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+1, Good! 2012-03-18 17:26:24
引用回帖:
1266108楼: Originally posted by junxiao0320 at 2012-03-15 11:19:06:
请教一下,我连啦两个月了,用的PQE30载体,连,504bp的片段,感觉连上了,但是酶切验证时,载体片段偏小,测序目的序列正确。旁边的载体序列不对。《补充:用的酶切位点:SPHI,SALI》

同时我用这个载体ECORI ...

测序目的片段正确 旁边载体序不对 是不是载体搞错了??
一般没切一下大小差不多就好,为了保险起见就测序最可靠。最好每一步都做到很踏实,否则后面心里都不踏实,万一出差错,最后可能要付出很大的代价。
20楼2012-03-18 06:23:43
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