应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】AFLP选择性扩增问题
81/1返回列表
查看: 1150  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

niemingyu

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】AFLP选择性扩增问题 已有5人参与

用北京鼎国的AFLP试剂盒做，在选择性扩增过程中，说明书上是配制25微升体系，但鉴于我实际情况，打算配制50微升体系，在下的问题是在反应体系倍增的情况下，以前东东都相应增加多少啊？？
原25体系：
预扩稀释样品：2
10倍PCR buffer 2.5
dNTPs             0.5
两种引物各1微升
Taq 酶      0.5
H2O          17.5
多谢了~
这里祝各位青年节快乐~~！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-04 09:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
都增加一倍不就行了，这还用问啊
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-04 13:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎回帖交流~~ 2010-05-04 20:55:38
niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:45:44
如果25ul现在没问题，增加一倍是最保险的，酶没有改变的必要，如果为了节约可以摸索一下，但是这跟体系多大没有关系。模板多少一般有个范围，所以改变可能也不影响
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-04 15:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:46:55
可以直接问鼎国的技术人员。
赞一下 回复此楼
如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
4楼2010-05-04 20:53:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ziyunpy

新虫 (小有名气)
niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:46:49
分别加倍最保险了
要是不够可适当减少酶和模板的用量
其他的用水补上
赞一下 回复此楼
努力不等以成功
5楼2010-05-04 22:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

过氧化氢

铁虫 (初入文坛)
加倍就行了
回复此楼
6楼2010-05-04 23:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★ ★ ★ ★ ★
niemingyu(金币+5): 2010-05-07 20:46:05
scelab(金币+5):high hand~ :tiger23: 2010-05-07 22:54:15
1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系，离子强度是个影响因素。
2、注意引物的浓度，定量到10 or 20 nM使用
3、注意dNTP的浓度。
4、特别注意——定量模板！测光吸收可粗略定量。
5、一定要混匀。

那么，就按照配制体系，一份一份的配就行。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-05-05 02:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-05 02:00:04:
1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系，离子强度是个影响因素。

...

反应曲线是并不是直线线性关系，但是加倍的目的是酶的浓度没有变化，那么对应在曲线点上的位置也没有变化，跟是不是直线线性就没有关系，我不太明白你说的是什么意思？
赞一下 回复此楼
8楼2010-05-07 20:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 niemingyu 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂（0805） +6 烟汐忆海 2026-03-16 16/800 2026-03-19 00:59 by 烟汐忆海
[考研] 材料专硕英一数二306 +4 z1z2z3879 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:00 by 楤哥
[教师之家] 焦虑 +8 水冰月月野兔 2026-03-13 12/600 2026-03-18 15:27 by 咪呜喵呜
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭