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niemingyu

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】AFLP选择性扩增问题 已有5人参与

用北京鼎国的AFLP试剂盒做,在选择性扩增过程中,说明书上是配制25微升体系,但鉴于我实际情况,打算配制50微升体系,在下的问题是在反应体系倍增的情况下,以前东东都相应增加多少啊??
原25体系:
预扩稀释样品:2
10倍PCR buffer 2.5
dNTPs             0.5
两种引物各1微升
Taq 酶      0.5
H2O          17.5
多谢了~
这里祝各位青年节快乐~~!
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-05 02:00:04:
1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系,离子强度是个影响因素。

...

反应曲线是并不是直线线性关系,但是加倍的目的是酶的浓度没有变化,那么对应在曲线点上的位置也没有变化,跟是不是直线线性就没有关系,我不太明白你说的是什么意思?
8楼2010-05-07 20:52:47
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
都增加一倍不就行了,这还用问啊
2楼2010-05-04 13:35:57
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎回帖交流~~ 2010-05-04 20:55:38
niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:45:44
如果25ul现在没问题,增加一倍是最保险的,酶没有改变的必要,如果为了节约可以摸索一下,但是这跟体系多大没有关系。模板多少一般有个范围,所以改变可能也不影响
3楼2010-05-04 15:30:20
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:46:55
可以直接问鼎国的技术人员。
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2010-05-04 20:53:09
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