24小时热门版块排行榜    

查看: 999  |  回复: 7

niemingyu

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】AFLP选择性扩增问题 已有5人参与

用北京鼎国的AFLP试剂盒做,在选择性扩增过程中,说明书上是配制25微升体系,但鉴于我实际情况,打算配制50微升体系,在下的问题是在反应体系倍增的情况下,以前东东都相应增加多少啊??
原25体系:
预扩稀释样品:2
10倍PCR buffer 2.5
dNTPs             0.5
两种引物各1微升
Taq 酶      0.5
H2O          17.5
多谢了~
这里祝各位青年节快乐~~!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
1949stone(金币+1):是个办法 不过好像酶的用量 模板等不用增加一倍吧 2010-05-04 13:53:42
都增加一倍不就行了,这还用问啊
2楼2010-05-04 13:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


lstt09nk(金币+1):欢迎回帖交流~~ 2010-05-04 20:55:38
niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:45:44
如果25ul现在没问题,增加一倍是最保险的,酶没有改变的必要,如果为了节约可以摸索一下,但是这跟体系多大没有关系。模板多少一般有个范围,所以改变可能也不影响
3楼2010-05-04 15:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:46:55
可以直接问鼎国的技术人员。
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
4楼2010-05-04 20:53:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ziyunpy

新虫 (小有名气)

niemingyu(金币+1): 2010-05-07 20:46:49
分别加倍最保险了
要是不够可适当减少酶和模板的用量
其他的用水补上
努力不等以成功
5楼2010-05-04 22:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

过氧化氢

铁虫 (初入文坛)

加倍就行了
6楼2010-05-04 23:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

★ ★ ★ ★ ★
niemingyu(金币+5): 2010-05-07 20:46:05
scelab(金币+5):high hand~ :tiger23: 2010-05-07 22:54:15
1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系,离子强度是个影响因素。
2、注意引物的浓度,定量到10 or 20 nM使用
3、注意dNTP的浓度。
4、特别注意——定量模板!测光吸收可粗略定量。
5、一定要混匀。

那么,就按照配制体系,一份一份的配就行。
7楼2010-05-05 02:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-05 02:00:04:
1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系,离子强度是个影响因素。

...

反应曲线是并不是直线线性关系,但是加倍的目的是酶的浓度没有变化,那么对应在曲线点上的位置也没有变化,跟是不是直线线性就没有关系,我不太明白你说的是什么意思?
8楼2010-05-07 20:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 niemingyu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见