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niemingyu

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 145.4
帖子: 74
在线: 15.4小时
虫号: 838130
注册: 2009-09-01
专业: 半导体科学与信息器件

[交流] 【求助/交流】AFLP选择性扩增问题已有5人参与

用北京鼎国的AFLP试剂盒做，在选择性扩增过程中，说明书上是配制25微升体系，但鉴于我实际情况，打算配制50微升体系，在下的问题是在反应体系倍增的情况下，以前东东都相应增加多少啊？？
原25体系：
预扩稀释样品：2
10倍PCR buffer 2.5
dNTPs          0.5
两种引物各1微升
Taq 酶    0.5
H2O       17.5
多谢了~
这里祝各位青年节快乐~~！

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1楼 2010-05-04 09:57:42

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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

应助: 11 (小学生)
贵宾: 0.005
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红花: 2
帖子: 1324
在线: 93.3小时
虫号: 596551
注册: 2008-09-09
专业: 疫苗学

★ ★ ★ ★ ★
niemingyu(金币+5): 2010-05-07 20:46:05
scelab(金币+5):high hand~ :tiger23: 2010-05-07 22:54:15

1、酶加倍并不合理。反应曲线并不是直线线性关系，离子强度是个影响因素。
2、注意引物的浓度，定量到10 or 20 nM使用
3、注意dNTP的浓度。
4、特别注意——定量模板！测光吸收可粗略定量。
5、一定要混匀。

那么，就按照配制体系，一份一份的配就行。

赞一下(2人)

7楼2010-05-05 02:00:04

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