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铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切已有5人参与

最近做酶切连接时用pcr验证时有目的条带分别作单酶切时条带大小也表明连接成功但是双酶切结果和单酶切一样没有我连接上的小片段后来我先用一种酶切然后回收产物后再用另一种酶切可是还是没有切下连接上的小片段我现在也不知道是否连接上了请各位大侠帮帮忙

1楼 2010-03-15 19:03:57

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银虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎常来交流~~~:tiger06: 2010-04-06 16:10

引用回帖:

Originally posted by huangdi07 at 2010-04-05 15:22:33:

感谢您的回答问题是我现在测序出来了序列是正确的 Hind III酶切位点突变了但是为什么用Hind III单酶切时还是可以切开啊

测序的开头部分有时不准确的。
既然测序证明目的序列在，两个酶切位点在，也许是甲基化情况影响了另一个酶切位点的酶切。

楼主不妨选择另外的双酶切位点，比如在目的基因内部或在外部。

智慧活法：不生气，不计较！

27楼2010-04-05 15:36:46

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