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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急！Oligo设计引物问题
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 急！Oligo设计引物问题 已有3人参与

最近几天一直在设计引物，貌似我的目的基因上下游引物的Tm、产物Tm差的比较多，选好上下游引物后，点击“Analyze”一栏下的“PCR”，弹出的对话框里给出的建议条件大致如下“Two-temperature PCR recommended: (68°/94°).”请教各位，这是什么意思！非常感谢
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1楼 2009-11-16 18:56:35
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实就是两步法PCR
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5楼2010-05-18 10:11:13
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1214318xy

铁虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也再设计，还没学会呐
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2楼2010-05-17 22:48:48
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1214318xy

铁虫 (著名写手)
我学会了再交流的，一两天吧
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3楼2010-05-17 22:49:14
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reasonspare

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
“Two-temperature PCR recommended: (68°/94°).”

也就是说你的引物的得退火温度较高，68。这个温度下TAQ酶性足够用，你只需要两个温pcr就行了
比如：
95 5分钟 1各循环
（94 1分钟，68 1分钟）30循环
72（或68） 5分钟。
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
4楼2010-05-18 06:12:29
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