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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆基因全长引物设计问题
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llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题 已有9人参与

已知一序列全长，如何根据此序列设计引物克隆出全长，我是新手，麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤，最近实验急需，非常感谢！！！
  我以前克隆过片段，没有做过全长，引物设计的一些基本原则都已了解，但是设计全长引物一点都不懂，劳烦各位，谢谢！
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1楼 2009-11-04 14:59:57
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-6 00:09:

1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶 ...

谢谢你的帮助，我现在设计了一对引物，上游引物是从序列第一次出现ATG的地方开始数出20个碱基，下游引物是从序列尾部ATT的地方向前数出20个碱基，我没有加酶切位点和保护碱基，因为刚接触分子生物学不久，学的东西也少，不知道怎样加，这样可以吗？
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9楼2009-11-06 10:17:41
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从ATG开始设计上游引物   TAA处设计下游引物
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3楼2009-11-04 16:22:43
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物上要加酶切位点和保护碱基
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4楼2009-11-04 17:02:39
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-4 17:02:
引物上要加酶切位点和保护碱基

具体要怎样加啊？
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5楼2009-11-05 15:31:25
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