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llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题 已有9人参与

已知一序列全长,如何根据此序列设计引物克隆出全长,我是新手,麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤,最近实验急需,非常感谢!!!
  我以前克隆过片段,没有做过全长,引物设计的一些基本原则都已了解,但是设计全长引物一点都不懂,劳烦各位,谢谢!
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-6 00:09:

1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基(从ATG开始),然后在它的5‘端加上游酶切位点,如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基,后在它的5‘端加上游酶 ...

谢谢你的帮助,我现在设计了一对引物,上游引物是从序列第一次出现ATG的地方开始数出20个碱基,下游引物是从序列尾部ATT的地方向前数出20个碱基,我没有加酶切位点和保护碱基,因为刚接触分子生物学不久,学的东西也少,不知道怎样加,这样可以吗?
9楼2009-11-06 10:17:41
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xiangao

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从ATG开始设计上游引物   TAA处设计下游引物
3楼2009-11-04 16:22:43
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小白3521

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物上要加酶切位点和保护碱基
4楼2009-11-04 17:02:39
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-4 17:02:
引物上要加酶切位点和保护碱基

具体要怎样加啊?
5楼2009-11-05 15:31:25
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