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llzhang2012

应助: (幼儿园)
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[交流] 克隆基因全长引物设计问题已有9人参与

已知一序列全长，如何根据此序列设计引物克隆出全长，我是新手，麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤，最近实验急需，非常感谢！！！
我以前克隆过片段，没有做过全长，引物设计的一些基本原则都已了解，但是设计全长引物一点都不懂，劳烦各位，谢谢！

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1楼 2009-11-04 14:59:57

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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

BioEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
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专业: 微生物生理与生物化学

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amisking(金币+3,VIP+0): 11-6 08:18

引用回帖:

Originally posted by llzhang2012 at 2009-11-5 15:33:

不到2kb

1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意：上下游的酶切位点不要设计反了。