24小时热门版块排行榜    

查看: 10000  |  回复: 32
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题 已有9人参与

已知一序列全长,如何根据此序列设计引物克隆出全长,我是新手,麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤,最近实验急需,非常感谢!!!
  我以前克隆过片段,没有做过全长,引物设计的一些基本原则都已了解,但是设计全长引物一点都不懂,劳烦各位,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-6 16:54
引用回帖:
Originally posted by llzhang2012 at 2009-11-6 10:17:

谢谢你的帮助,我现在设计了一对引物,上游引物是从序列第一次出现ATG的地方开始数出20个碱基,下游引物是从序列尾部ATT的地方向前数出20个碱基,我没有加酶切位点和保护碱基,因为刚接触分子生物学不久,学的东 ...

如果你只是想P出各个基因的话,这样设计就可以了。但是你P出这个基因后肯定是要研究它的功能,对它进行表达或者其他的吧。所以后面你肯定是要连到相应的载体上,对吧?如果你不设计酶切位点的话,要与目的载体连接的话就需要用平端连接,那样假阳性率会很高,并且需要判断你插入的序列的方向,因此最好还是加上与你的目的载体上相应的酶切位点。
10楼2009-11-06 16:14:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

xiangao

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从ATG开始设计上游引物   TAA处设计下游引物
3楼2009-11-04 16:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物上要加酶切位点和保护碱基
4楼2009-11-04 17:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-4 17:02:
引物上要加酶切位点和保护碱基

具体要怎样加啊?
5楼2009-11-05 15:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +9 majunge000 2026-08-11 11/550 2026-08-15 23:20 by botar
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见