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llzhang2012

应助: (幼儿园)
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[交流] 克隆基因全长引物设计问题已有9人参与

已知一序列全长，如何根据此序列设计引物克隆出全长，我是新手，麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤，最近实验急需，非常感谢！！！
我以前克隆过片段，没有做过全长，引物设计的一些基本原则都已了解，但是设计全长引物一点都不懂，劳烦各位，谢谢！

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1楼2009-11-04 14:59:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

BioEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
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专业: 微生物生理与生物化学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-6 16:54

引用回帖:

Originally posted by llzhang2012 at 2009-11-6 10:17:

谢谢你的帮助，我现在设计了一对引物，上游引物是从序列第一次出现ATG的地方开始数出20个碱基，下游引物是从序列尾部ATT的地方向前数出20个碱基，我没有加酶切位点和保护碱基，因为刚接触分子生物学不久，学的东 ...

如果你只是想P出各个基因的话，这样设计就可以了。但是你P出这个基因后肯定是要研究它的功能，对它进行表达或者其他的吧。所以后面你肯定是要连到相应的载体上，对吧？如果你不设计酶切位点的话，要与目的载体连接的话就需要用平端连接，那样假阳性率会很高，并且需要判断你插入的序列的方向，因此最好还是加上与你的目的载体上相应的酶切位点。