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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆基因全长引物设计问题
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llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题 已有9人参与

已知一序列全长，如何根据此序列设计引物克隆出全长，我是新手，麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤，最近实验急需，非常感谢！！！
  我以前克隆过片段，没有做过全长，引物设计的一些基本原则都已了解，但是设计全长引物一点都不懂，劳烦各位，谢谢！
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1楼 2009-11-04 14:59:57
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 11-6 16:54
引用回帖:
Originally posted by llzhang2012 at 2009-11-6 10:17:

谢谢你的帮助，我现在设计了一对引物，上游引物是从序列第一次出现ATG的地方开始数出20个碱基，下游引物是从序列尾部ATT的地方向前数出20个碱基，我没有加酶切位点和保护碱基，因为刚接触分子生物学不久，学的东 ...

如果你只是想P出各个基因的话，这样设计就可以了。但是你P出这个基因后肯定是要研究它的功能，对它进行表达或者其他的吧。所以后面你肯定是要连到相应的载体上，对吧？如果你不设计酶切位点的话，要与目的载体连接的话就需要用平端连接，那样假阳性率会很高，并且需要判断你插入的序列的方向，因此最好还是加上与你的目的载体上相应的酶切位点。
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10楼2009-11-06 16:14:26
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
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从ATG开始设计上游引物   TAA处设计下游引物
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3楼2009-11-04 16:22:43
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
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引物上要加酶切位点和保护碱基
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4楼2009-11-04 17:02:39
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llzhang2012

引用回帖:
Originally posted by 小白3521 at 2009-11-4 17:02:
引物上要加酶切位点和保护碱基

具体要怎样加啊？
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5楼2009-11-05 15:31:25
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