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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有关BL21(DE3)的基因敲除的问题
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生物狗小落

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-10-22 10:07:52
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lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在做RED都比直接在BL21(DE3)中来的有效快速
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
3楼2018-10-28 15:06:20
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donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用pCad和pTargetF构建Crispr敲除系统，可以私信交流
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2楼2018-10-23 09:07:36
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lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可以做crispr系统，确切的是联合使用CRISPR和RED系统，参见
《Multigene Editing in the Escherichia coli Genome via the CRISPR-Cas9 System》
《Coupling the CRISPR/Cas9 System with Lambda Red Recombineering Enables Simplified Chromosomal Gene Replacement in Escherichia coli》
这几个质粒addgene上都有的卖的，会收取手工费，当然前提你得是非盈利机构
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
4楼2018-10-28 15:11:30
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wangchuang22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？
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5楼2018-12-12 22:29:33
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nansty

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

你好，我想请教一下，你提到的JM109（DE3），DH5a（DE3）这些菌株有商业化的吗？如果有的话你是从哪家买的？如果是实验室构建的，方便告知哪个实验室有保存这样的菌吗？非常感谢。
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6楼2019-03-14 17:58:19
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司马错

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchuang22 at 2018-12-12 22:29:33
请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？...

这个我也遇到过，感觉不可能做出来
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优秀成为习惯
7楼2019-08-13 23:17:27
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司马错

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by nansty at 2019-03-14 17:58:19
你好，我想请教一下，你提到的JM109（DE3），DH5a（DE3）这些菌株有商业化的吗？如果有的话你是从哪家买的？如果是实验室构建的，方便告知哪个实验室有保存这样的菌吗？非常感谢。...

北京华越洋 好像卖这些菌株 ，另外关于大肠的基因编辑 也可以参见下文
Development of a fast and easy method for Escherichia coli genome editing with CRISPR/Cas9
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优秀成为习惯
8楼2019-08-13 23:19:15
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gary0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 司马错 at 2019-08-13 23:17:27
这个我也遇到过，感觉不可能做出来...

请问最后您用什么方法进行基因敲除的呀，我的pKD46也是转不进去
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9楼2023-06-21 15:22:26
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gary0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchuang22 at 2018-12-12 22:29:33
请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？...

请问最后用什么方法进行基因操作的呀，我的也是转不进去
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10楼2023-06-21 15:23:28
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