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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有关BL21(DE3)的基因敲除的问题
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生物狗小落

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-10-22 10:07:52
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wangchuang22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？
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5楼2018-12-12 22:29:33
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donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用pCad和pTargetF构建Crispr敲除系统，可以私信交流
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2楼2018-10-23 09:07:36
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lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在做RED都比直接在BL21(DE3)中来的有效快速
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
3楼2018-10-28 15:06:20
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lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可以做crispr系统，确切的是联合使用CRISPR和RED系统，参见
《Multigene Editing in the Escherichia coli Genome via the CRISPR-Cas9 System》
《Coupling the CRISPR/Cas9 System with Lambda Red Recombineering Enables Simplified Chromosomal Gene Replacement in Escherichia coli》
这几个质粒addgene上都有的卖的，会收取手工费，当然前提你得是非盈利机构
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
4楼2018-10-28 15:11:30
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