应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有关BL21(DE3)的基因敲除的问题
111/2返回列表12下一页
查看: 4241  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

生物狗小落

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2018-10-22 10:07:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在做RED都比直接在BL21(DE3)中来的有效快速
赞一下(1人) 回复此楼
一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
3楼2018-10-28 15:06:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用pCad和pTargetF构建Crispr敲除系统，可以私信交流
赞一下 回复此楼
2楼2018-10-23 09:07:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可以做crispr系统，确切的是联合使用CRISPR和RED系统，参见
《Multigene Editing in the Escherichia coli Genome via the CRISPR-Cas9 System》
《Coupling the CRISPR/Cas9 System with Lambda Red Recombineering Enables Simplified Chromosomal Gene Replacement in Escherichia coli》
这几个质粒addgene上都有的卖的，会收取手工费，当然前提你得是非盈利机构
赞一下 回复此楼
一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
4楼2018-10-28 15:11:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangchuang22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？
赞一下 回复此楼
5楼2018-12-12 22:29:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nansty

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21，建议不要用RED系统，徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话，可以尝试在其他同源化T7的菌株里做，现在有很多了，比如JM109（DE3），DH5a（DE3），甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

你好，我想请教一下，你提到的JM109（DE3），DH5a（DE3）这些菌株有商业化的吗？如果有的话你是从哪家买的？如果是实验室构建的，方便告知哪个实验室有保存这样的菌吗？非常感谢。
赞一下 回复此楼
6楼2019-03-14 17:58:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司马错

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchuang22 at 2018-12-12 22:29:33
请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？...

这个我也遇到过，感觉不可能做出来
赞一下 回复此楼
优秀成为习惯
7楼2019-08-13 23:17:27
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司马错

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by nansty at 2019-03-14 17:58:19
你好，我想请教一下，你提到的JM109（DE3），DH5a（DE3）这些菌株有商业化的吗？如果有的话你是从哪家买的？如果是实验室构建的，方便告知哪个实验室有保存这样的菌吗？非常感谢。...

北京华越洋 好像卖这些菌株 ，另外关于大肠的基因编辑 也可以参见下文
Development of a fast and easy method for Escherichia coli genome editing with CRISPR/Cas9
赞一下 回复此楼
优秀成为习惯
8楼2019-08-13 23:19:15
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gary0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 司马错 at 2019-08-13 23:17:27
这个我也遇到过，感觉不可能做出来...

请问最后您用什么方法进行基因敲除的呀，我的pKD46也是转不进去
赞一下 回复此楼
9楼2023-06-21 15:22:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gary0

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchuang22 at 2018-12-12 22:29:33
请问一下，关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次，但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况？...

请问最后用什么方法进行基因操作的呀，我的也是转不进去
赞一下 回复此楼
10楼2023-06-21 15:23:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 生物狗小落 的主题更新
111/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭