24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4297  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

生物狗小落

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司马错

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangchuang22 at 2018-12-12 22:29:33
请问一下,关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次,但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况?...

这个我也遇到过,感觉不可能做出来
优秀成为习惯
7楼2019-08-13 23:17:27
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用pCad和pTargetF构建Crispr敲除系统,可以私信交流
2楼2018-10-23 09:07:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bl21,建议不要用RED系统,徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话,可以尝试在其他同源化T7的菌株里做,现在有很多了,比如JM109(DE3),DH5a(DE3),甚至自己在K12里做了溶源化在做RED都比直接在BL21(DE3)中来的有效快速
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
3楼2018-10-28 15:06:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可以做crispr系统,确切的是联合使用CRISPR和RED系统,参见
《Multigene Editing in the Escherichia coli Genome via the CRISPR-Cas9 System》
《Coupling the CRISPR/Cas9 System with Lambda Red Recombineering Enables Simplified Chromosomal Gene Replacement in Escherichia coli》
这几个质粒addgene上都有的卖的,会收取手工费,当然前提你得是非盈利机构
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
4楼2018-10-28 15:11:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 求博导|生物质基多孔碳/超级电容方向,已有相关成果,寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[考研] 接受任何调剂 +4 也就是栗子 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:57 by Equinoxhua
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +11 刘墨墨 2026-04-13 11/550 2026-04-17 15:35 by wanganpin
[考研] 297,工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 22408 312求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-14 25/1250 2026-04-16 21:21 by Art1977
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 求助调剂,跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 求调剂,一志愿材料科学与工程985,365分, +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见