24小时热门版块排行榜    

查看: 4557  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

生物狗小落

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

也可以做crispr系统,确切的是联合使用CRISPR和RED系统,参见
《Multigene Editing in the Escherichia coli Genome via the CRISPR-Cas9 System》
《Coupling the CRISPR/Cas9 System with Lambda Red Recombineering Enables Simplified Chromosomal Gene Replacement in Escherichia coli》
这几个质粒addgene上都有的卖的,会收取手工费,当然前提你得是非盈利机构
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
4楼2018-10-28 15:11:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

donkey2017

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以用pCad和pTargetF构建Crispr敲除系统,可以私信交流
2楼2018-10-23 09:07:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwq652

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

bl21,建议不要用RED系统,徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话,可以尝试在其他同源化T7的菌株里做,现在有很多了,比如JM109(DE3),DH5a(DE3),甚至自己在K12里做了溶源化在做RED都比直接在BL21(DE3)中来的有效快速
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
3楼2018-10-28 15:06:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangchuang22

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2018-10-28 15:06:20
bl21,建议不要用RED系统,徒劳。看看有没有成功的报道就知道了。如果只是看重BL21(DE3)中的T7的话,可以尝试在其他同源化T7的菌株里做,现在有很多了,比如JM109(DE3),DH5a(DE3),甚至自己在K12里做了溶源化在 ...

请问一下,关于BL21 DE3的敲除。我化转了很多次,但就是无法将pKD46转入到BL21 DE3中。你是否也遇到这种情况?
5楼2018-12-12 22:29:33
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +12 晴天加油 2026-08-26 13/650 2026-08-28 11:32 by skyjudy
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 11/550 2026-08-28 10:45 by Kittylucky
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见