[求助] 质粒和片段的融合PCR

2楼: Originally posted by 白话八股 at 2017-09-19 01:30:11
质粒和片段做融合pcr？你干嘛不直接用无缝克隆做。

3楼: Originally posted by maoxuequn at 2017-09-19 06:48:47
这个试剂盒也是说很快的，只要把片段和载体线性化后以比例加在一起反应15min就可以做转化了
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2楼: Originally posted by 白话八股 at 2017-09-19 01:30:11
质粒和片段做融合pcr？你干嘛不直接用无缝克隆做。

5楼: Originally posted by maoxuequn at 2017-09-19 11:56:50
我做的就是无缝克隆。感受态没问题，tm没问题（58和60）。试剂盒本身的模板和载体做了对照 没问题。线性化载体做了感受态，没问题。是不是最大的问题就是目的基因。但是想不出原因？是纯化还是引物设计。
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7楼: Originally posted by liuxiaofei at 2017-11-18 16:35:29
这种事情没办法解释，我同事构了七个载体用这种方法，结果四个始终构不成，载体重新切、片段重新扩，就是不行，这个时候就还用传统的酶切位点了
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