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质粒和片段的融合PCR
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对片段和载体一起设置引物，用的是pet的22，分别进行pcr回收，跑胶。然后用试剂盒进行重组。 但是就是连不上。每次涂平板长出来的菌都是空载。技术反应说是载体在回收的时候把模板也回收进去，这就会长出很多空载。 我是新手，不明白为什么，根据说明书上帝要求，tm值要有60。载体和片段都是按照比例来的。但是为什么就是连不上？ |
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maoxuequn
2楼2017-09-19 01:30:11
3楼2017-09-19 06:48:47
4楼2017-09-19 10:55:40
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我做的就是无缝克隆。感受态没问题，tm没问题（58和60）。试剂盒本身的模板和载体做了对照 没问题。线性化载体做了感受态，没问题。是不是最大的问题就是目的基因。但是想不出原因？是纯化还是引物设计。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-09-19 11:56:50
6楼2017-10-31 22:02:52
liuxiaofei
铁虫 (小有名气)
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7楼2017-11-18 16:35:29
liuxiaofei
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8楼2017-11-18 16:36:45