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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切
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bunntly

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒酶切

本人看到一篇文献有些不清楚啊 请大家指教。
1、“构建一携带有假定的ccpAx起始密码子的ccpAx::egfp融合基因质粒，ccpAx基因用木醋杆菌ATCC23769基因组作为模板进行PCR扩增，SP(orf21)和AP2(orf2)作为引物。扩增后的ccpAx产物用SacI和BglII酶切处理，而后连接到用SacI和BamHI酶切处理后的质粒pTIE上产生质粒pT121E质粒。”
扩增后的产物和质粒为什么用不同的酶切啊，不应该用相同的酶切而后才能连上吗？
2、“扩增后的CcpAx基因片段用KpnI和BamHI酶切处理后连接到用相同限制性酶切处理的pUC19质粒生成质粒pUC19-CcpAx。用NdeI和BamHI酶切处理质粒pUC19-CcpAx获得CcpAx基因。”
后面一步酶切CcpAx时为什么不用KpnI和BamHI酶而用的是NdeI和BamHI酶呢？
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1楼 2013-04-12 20:12:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bunntly(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-13 10:23:58
1. BglII与BamHI是同尾酶，切出相同的粘性末端，所以可以相连。
2. 也许是为了下一步克隆方便，所以选取不同的酶切位点切出基因。
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2楼2013-04-13 05:28:20
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bunntly

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-13 05:28:20
1. BglII与BamHI是同尾酶，切出相同的粘性末端，所以可以相连。
2. 也许是为了下一步克隆方便，所以选取不同的酶切位点切出基因。

谢谢啊 本人刚接触分子还不知道还有同尾酶这个概念
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3楼2013-04-13 12:29:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
bunntly: 金币+1 2013-04-15 19:25:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by bunntly at 2013-04-13 12:29:17
谢谢啊 本人刚接触分子还不知道还有同尾酶这个概念...

慢慢学习就就是了。做克隆的时候一般是用同样的酶切再连接，但有时候根据基因序列的实际情况，会用不同的酶切出相同的粘性末端后连接。
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4楼2013-04-14 00:40:18
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