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bunntly木虫 (正式写手)
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质粒酶切
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本人看到一篇文献有些不清楚啊 请大家指教。 1、“构建一携带有假定的ccpAx起始密码子的ccpAx::egfp融合基因质粒，ccpAx基因用木醋杆菌ATCC23769基因组作为模板进行PCR扩增，SP(orf21)和AP2(orf2)作为引物。扩增后的ccpAx产物用SacI和BglII酶切处理，而后连接到用SacI和BamHI酶切处理后的质粒pTIE上产生质粒pT121E质粒。” 扩增后的产物和质粒为什么用不同的酶切啊，不应该用相同的酶切而后才能连上吗？ 2、“扩增后的CcpAx基因片段用KpnI和BamHI酶切处理后连接到用相同限制性酶切处理的pUC19质粒生成质粒pUC19-CcpAx。用NdeI和BamHI酶切处理质粒pUC19-CcpAx获得CcpAx基因。” 后面一步酶切CcpAx时为什么不用KpnI和BamHI酶而用的是NdeI和BamHI酶呢？ |
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