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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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maoxuequn

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒和片段的融合PCR

对片段和载体一起设置引物,用的是pet的22,分别进行pcr回收,跑胶。然后用试剂盒进行重组。
但是就是连不上。每次涂平板长出来的菌都是空载。技术反应说是载体在回收的时候把模板也回收进去,这就会长出很多空载。
我是新手,不明白为什么,根据说明书上帝要求,tm值要有60。载体和片段都是按照比例来的。但是为什么就是连不上?
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wareer

铜虫 (小有名气)

无缝克隆应该不会空载,除非你直接把载体不留空线性化了

发自小木虫Android客户端
6楼2017-10-31 22:02:52
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白话八股

金虫 (正式写手)

质粒和片段做融合pcr?你干嘛不直接用无缝克隆做。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

最爱的那个人会出现在身边。
2楼2017-09-19 01:30:11
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maoxuequn

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 白话八股 at 2017-09-19 01:30:11
质粒和片段做融合pcr?你干嘛不直接用无缝克隆做。

这个试剂盒也是说很快的,只要把片段和载体线性化后以比例加在一起反应15min就可以做转化了

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-09-19 06:48:47
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白话八股

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by maoxuequn at 2017-09-19 06:48:47
这个试剂盒也是说很快的,只要把片段和载体线性化后以比例加在一起反应15min就可以做转化了
...

来个试用装,分分钟搞定,阳性率还高
最爱的那个人会出现在身边。
4楼2017-09-19 10:55:40
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