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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 切胶回收，DNA浓度太低
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红木深衣

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[交流] 切胶回收，DNA浓度太低

pcr之后做切胶回收，浓度太低，从个位数到几十ng/ul不等，而且在260nm没有峰，有的峰是230nm，这可以用来做酶切吗？或者可以pcr产物直接酶切吗

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1楼 2017-08-30 22:12:31
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llsskk112233

新虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:44:39
一般都不用pcr产物酶切，因为它含有别的缓冲液，会影响切酶的活性等等，所以最好是胶回收，且回收溶剂最好用水，不过听说用水作溶剂会使测的结果较低，但是浓度低还与pcr循环多少，还有试剂盒用什么牌子有关

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红木深衣
2楼2017-08-30 22:29:20
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mlxmiao

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:45:02
都可以，少的量多做点。如果酶切后容易区别开，用PCR好了，毕竟少一个步骤。以与MARKER相比为主要参考对象

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3楼2017-08-30 22:39:36
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西西sm

新虫 (正式写手)
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如果单一条带可以用纯化试剂盒，比较方便，如果胶回收，我试过几个都浓度低，不过也可以用的

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4楼2017-08-31 10:02:40
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Isaac Li

禁虫 (著名写手)
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红木深衣
5楼2017-09-01 17:55:43
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红木深衣

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引用回帖:
5楼: Originally posted by Isaac Li at 2017-09-01 17:55:43
260nm没有吸收值就是没有核算,230出的吸收峰都是些盐等杂质,没必要回收了,估计是你pcr没做好

谢谢

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6楼2017-09-02 06:21:22
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红木深衣

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引用回帖:
2楼: Originally posted by llsskk112233 at 2017-08-30 22:29:20
一般都不用pcr产物酶切，因为它含有别的缓冲液，会影响切酶的活性等等，所以最好是胶回收，且回收溶剂最好用水，不过听说用水作溶剂会使测的结果较低，但是浓度低还与pcr循环多少，还有试剂盒用什么牌子有关
...

谢谢

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7楼2017-09-02 06:21:45
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能量车gogogo

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:31:56
胶回收看你用什么牌子的试剂盒了，个人只用过TAKARA的还不错，250ul的pcr产物，不出意外，回收浓度都会在100ng/ul以上。
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人不会永远十七岁，但永远有人十七岁
8楼2017-09-02 16:32:37
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810763156

新虫 (小有名气)
★
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楼主。我现在和你情况一样。你最后能用吗。看到回复我下。谢谢

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9楼2018-01-21 10:01:08
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