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红木深衣

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[交流] 切胶回收,DNA浓度太低

pcr之后做切胶回收,浓度太低,从个位数到几十ng/ul不等,而且在260nm没有峰,有的峰是230nm,这可以用来做酶切吗?或者可以pcr产物直接酶切吗

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llsskk112233

新虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:44:39
一般都不用pcr产物酶切,因为它含有别的缓冲液,会影响切酶的活性等等,所以最好是胶回收,且回收溶剂最好用水,不过听说用水作溶剂会使测的结果较低,但是浓度低还与pcr循环多少,还有试剂盒用什么牌子有关

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2楼2017-08-30 22:29:20
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-31 07:45:02
都可以,少的量多做点。如果酶切后容易区别开,用PCR好了,毕竟少一个步骤。以与MARKER相比为主要参考对象

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3楼2017-08-30 22:39:36
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西西sm

新虫 (正式写手)


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如果单一条带可以用纯化试剂盒,比较方便,如果胶回收,我试过几个都浓度低,不过也可以用的

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4楼2017-08-31 10:02:40
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Isaac Li

禁虫 (著名写手)


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5楼2017-09-01 17:55:43
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红木深衣

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引用回帖:
5楼: Originally posted by Isaac Li at 2017-09-01 17:55:43
260nm没有吸收值就是没有核算,230出的吸收峰都是些盐等杂质,没必要回收了,估计是你pcr没做好

谢谢

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6楼2017-09-02 06:21:22
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红木深衣

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送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by llsskk112233 at 2017-08-30 22:29:20
一般都不用pcr产物酶切,因为它含有别的缓冲液,会影响切酶的活性等等,所以最好是胶回收,且回收溶剂最好用水,不过听说用水作溶剂会使测的结果较低,但是浓度低还与pcr循环多少,还有试剂盒用什么牌子有关
...

谢谢

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7楼2017-09-02 06:21:45
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能量车gogogo

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-02 22:31:56
胶回收看你用什么牌子的试剂盒了,个人只用过TAKARA的还不错,250ul的pcr产物,不出意外,回收浓度都会在100ng/ul以上。
人不会永远十七岁,但永远有人十七岁
8楼2017-09-02 16:32:37
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810763156

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主。我现在和你情况一样。你最后能用吗。看到回复我下。谢谢

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9楼2018-01-21 10:01:08
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