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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR溶解曲线
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SophyW

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR溶解曲线 已有5人参与

新手跑新仪器，定量PCR，跑出来溶解曲线好奇怪啊！为什么标线的峰都在一个位置，但样品的峰却在前面的位置，求大神解疑

定量PCR溶解曲线


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1楼 2017-07-24 13:34:45
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liuanna

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:41:23
引物特异性不好，需要更换引物，在荧光定量PCR中引物是非常重要的，所以设计引物的时候要特别注意，样品那个前面的峰就是非特异峰。
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精准医学
4楼2017-07-24 22:28:59
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:40:59
是不是样品浓度太低，导致引物二聚体更加明显？或者是引物特异性不高，P出其他杂片段。
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保持平常心❤
2楼2017-07-24 16:17:04
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:41:11
1、非特异性扩增。可能需要更换引物。或者提高退火温度。

2、在主峰前明显有小峰，可能是引物二聚体，也可能是非特异扩增，提高退火温度或降低引物浓度试试。
赞一下(2人) 回复此楼
及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-24 19:08:38
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得可以尝试再跑一次，看看结果是否依然如此。再考虑一下引物特异性的问题！
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5楼2017-07-25 10:25:50
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