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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR溶解曲线
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SophyW

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR溶解曲线 已有5人参与

新手跑新仪器，定量PCR，跑出来溶解曲线好奇怪啊！为什么标线的峰都在一个位置，但样品的峰却在前面的位置，求大神解疑

定量PCR溶解曲线


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1楼 2017-07-24 13:34:45
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:40:59
是不是样品浓度太低，导致引物二聚体更加明显？或者是引物特异性不高，P出其他杂片段。
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保持平常心❤
2楼2017-07-24 16:17:04
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:41:11
1、非特异性扩增。可能需要更换引物。或者提高退火温度。

2、在主峰前明显有小峰，可能是引物二聚体，也可能是非特异扩增，提高退火温度或降低引物浓度试试。
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-24 19:08:38
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liuanna

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-25 07:41:23
引物特异性不好，需要更换引物，在荧光定量PCR中引物是非常重要的，所以设计引物的时候要特别注意，样品那个前面的峰就是非特异峰。
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精准医学
4楼2017-07-24 22:28:59
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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我觉得可以尝试再跑一次，看看结果是否依然如此。再考虑一下引物特异性的问题！
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5楼2017-07-25 10:25:50
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九天飞鹰_110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用荧光定量PCR 的扩增条件进行PCR扩增，把产物跑个琼脂糖凝胶电泳看看是否有明显的引物二聚体或非特异扩增，如果有，可提高退火温度或使用新引物。
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6楼2017-07-30 00:47:51
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