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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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18388248062

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 克隆基因为什么一直克隆不出来 已有5人参与

设计引物,以cDNA为模板,pcr跑了无数次,退火温度换了无数次,为什么就是克隆不出来,即使重新设计引物,或者分段设计引物,前半段好不容易出现条带,去测序,可又什么也不是,好心累,求各位大神指导下

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18388248062

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by 薄荷颜料 at 2017-06-20 21:45:45
1,表达部位
你的cdna取的是什么材料什么部位的?或许你要的基因在这个部位根本不表达?换个部位试试?
2,用基因组做pcr扩基因
如果是过表达,那最后转录翻译都是一样的,如果是看定位什么的,就有差异了
3,换 ...

我的那个基因只有在球茎才会有,其他部位没有,我去NCBI上找,找不到基因组,而且我那个基因只有目的片段,ATG…TAG。不像其他基因那样两端有多余的片段,可以设计引物,我这个我导师直接拿两尾做引物,硬是做不出来。心累

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9楼2017-06-21 17:32:04
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hx814102

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

肯定模板或引物有一个出了问题

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Everydayisanewday!
2楼2017-06-19 18:18:46
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hhz09423

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

3楼2017-06-19 19:52:54
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薄荷颜料

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-06-20 23:09:52
1,表达部位
你的cdna取的是什么材料什么部位的?或许你要的基因在这个部位根本不表达?换个部位试试?
2,用基因组做pcr扩基因
如果是过表达,那最后转录翻译都是一样的,如果是看定位什么的,就有差异了
3,换个模板
问师兄师姐师弟师妹还有其他实验室的战友们借一个吧,或者换个人给你p一下,全部用他的试剂
4楼2017-06-20 21:45:45
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