| 查看: 1117 | 回复: 2 | |||
[交流]
【求助/交流】实验啊，老做不出来(HEV（正链RNA病毒）的全基因组克隆) 已有2人参与
|
|
小弟一直在做HEV（正链RNA病毒，粪口传播）的全基因组克隆。可是一直没结果。现在把我的条件拿出来，请各位高手帮我分析一下原因吧，郁闷死了！ 一：RNA的提取 用OMEGA试剂盒提取猪粪中的RNA。（猪粪用PBS溶解）。 二：RT 反转录用的是MBI试剂盒。RNA定量为1ug。反转录引物用过特异性引物和oligo（dT）。或者两者混合。 三：PCR PCR所用引物特异性很好（软件比对结果显示），cDNA加2ul。 四：目的片段 一个长1.2k。一个约6.35k。1.2k的用的是TAKARA的普通Taq酶。6.35k的用的是TAKARA的LA Taq酶。 结果： 可以说一直没有结果。1.2kP出的条带都小于500bp，要不就什么都没有。6.35k的结果也一样，要不什么都没有，要不在9.6k处有一条不清晰的带（不可能，因为HEV基因组全长才7.2k）。 说明：RNA肯定是提出来了，因为做阳性筛选的时候扩增的436bp的条带每次重复都会出现，即阳性对照没问题（扩增片段靠近基因组3’端）；RT应该没问题，因为试剂盒中的阳性对照扩增也没问题。 小弟真的很郁闷，一个简单的RT-PCR都做不好，也难怪2个老板都十分恼怒。请各位高手帮我分析分析原因吧，谢谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有203人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
zhandeguo1
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 369.8
- 散金: 14
- 帖子: 128
- 在线: 20.8小时
- 虫号: 1065590
- 注册: 2010-07-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2010-09-30 19:37:43
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
 本帖仅楼主可见 |
3楼2010-09-30 19:39:23
20