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921293056

银虫 (初入文坛)

[求助] 目的片段的大小 已有1人参与

目的片段的大小
各位高手:
大家好,我用别人设计的引物做PCR,可是跑出来的条带差不多是100bp,所以我想请高手帮我查或是比对一下我的引物的扩增片段的大小。
人类肠道柔嫩梭杆菌
柔-F5' cctgcgtgaagtccgaattg3'
R 5'ccttgcggttgaactactgg3'
附上反应条件94度3min预变性,94度变性30秒,52到64度分七管梯度,72度延伸一分钟,30个循环,编号依次随温度增高。琼脂糖凝胶是1.5%的胶
万分感激。。。附上条带
会不会都是引物二聚体,这该怎么办呢?

目的片段的大小


目的片段的大小-1


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15978432804

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-29 08:29:54
你可以试着用一下降落pcr,或是看一下序列是否有特殊结构

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2楼2017-05-29 00:31:20
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921293056

银虫 (初入文坛)

降落PCR怎么设置,实验室用的是伯乐S1000。

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3楼2017-05-29 13:59:23
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laolaohutu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:41:09
先确认下要扩增的目的基因片段是多长,如果扩出来的片段和预计片段不符,那么肯定不是你要的!如果预计片段很小,建议选用分子量小一点的Marker,同时增加凝胶的浓度和电泳的时间

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

请享受无法回避的痛苦
4楼2017-05-30 15:20:57
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921293056

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by laolaohutu at 2017-05-30 15:20:57
先确认下要扩增的目的基因片段是多长,如果扩出来的片段和预计片段不符,那么肯定不是你要的!如果预计片段很小,建议选用分子量小一点的Marker,同时增加凝胶的浓度和电泳的时间

因为是找别人帮忙设计的引物序列,现在正在询问中。我又测量了我的DNA模板,发现OD260/OD280=0.75,感觉自己的模板DNA提取也有问题。打算重新再提取一下DNA,再重新开始验证。谢谢了

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5楼2017-05-31 08:08:34
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