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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的片段的大小
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921293056

银虫 (初入文坛)

[求助] 目的片段的大小 已有1人参与

目的片段的大小
各位高手：
大家好，我用别人设计的引物做PCR，可是跑出来的条带差不多是100bp，所以我想请高手帮我查或是比对一下我的引物的扩增片段的大小。
人类肠道柔嫩梭杆菌
柔-F5' cctgcgtgaagtccgaattg3'
R 5'ccttgcggttgaactactgg3'
附上反应条件94度3min预变性，94度变性30秒，52到64度分七管梯度，72度延伸一分钟，30个循环，编号依次随温度增高。琼脂糖凝胶是1.5%的胶
万分感激。。。附上条带
会不会都是引物二聚体，这该怎么办呢？

目的片段的大小


目的片段的大小-1


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1楼 2017-05-28 21:09:54
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15978432804

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-29 08:29:54
你可以试着用一下降落pcr,或是看一下序列是否有特殊结构

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2楼2017-05-29 00:31:20
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921293056

银虫 (初入文坛)
降落PCR怎么设置，实验室用的是伯乐S1000。

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3楼2017-05-29 13:59:23
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laolaohutu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:41:09
先确认下要扩增的目的基因片段是多长，如果扩出来的片段和预计片段不符，那么肯定不是你要的！如果预计片段很小，建议选用分子量小一点的Marker，同时增加凝胶的浓度和电泳的时间
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921293056
请享受无法回避的痛苦
4楼2017-05-30 15:20:57
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921293056

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by laolaohutu at 2017-05-30 15:20:57
先确认下要扩增的目的基因片段是多长，如果扩出来的片段和预计片段不符，那么肯定不是你要的！如果预计片段很小，建议选用分子量小一点的Marker，同时增加凝胶的浓度和电泳的时间

因为是找别人帮忙设计的引物序列，现在正在询问中。我又测量了我的DNA模板，发现OD260/OD280=0.75，感觉自己的模板DNA提取也有问题。打算重新再提取一下DNA，再重新开始验证。谢谢了

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5楼2017-05-31 08:08:34
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